[发明专利]检测转cp4-epsps基因大豆及其深加工产品中转基因成份的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种检测转cp4-epsps基因大豆及其深加工产品中转基因成份的方法，包括：样品中总DNA提取、PCR扩增反应，其特征在于：

大豆内源lectin基因上游引物为SEQ ID N_O：1，下游引物为SEQ ID N_O：2；

cp4-epsps基因上游引物为SEQ ID N_O：3，下游引物为SEQ ID N_O：4。

2.根据权利要求1所述的检测转cp4-epsps基因大豆及其深加工产品中转基因成份的方法，其特征在于：所述PCR扩增反应的体系为：PCR反应缓冲液、Taq DNA聚合酶、引物、DNA之间的体积比为50∶1∶2∶1；在扩增反应中，变性：94℃3～10min；扩增：94℃30s，40～65℃30s，72℃20～60s；循环：30～45；后延伸：72℃10min；

所述Taq DNA聚合酶的浓度为3～10U/μl，所述引物的浓度为15～40μM。

3.根据权利要求2所述的检测转cp4-epsps基因大豆及其深加工产品中转基因成份的方法，其特征在于：PCR反应缓冲液由10×PCR buffer、MgCl₂、dNTPs和dd H₂O组成，它们的体积比为5∶3∶1∶41；

所述MgCl₂的浓度为15～35mM，所述dNTPs的浓度为5～15mM each。

4.根据权利要求1-3所述的检测转cp4-epsps基因大豆及其深加工产品中转基因成份的方法，其特征在于：PCR扩增反应后通过琼脂糖凝胶电泳检测；所述的琼脂糖凝胶电泳检测是指制备琼脂糖凝胶，60～100V恒压电泳，30～60min；EB染色后于凝胶成像仪上观察和拍照。

5.根据权利要求1所述的检测转cp4-epsps基因大豆及其深加工产品中转基因成份的方法，其特征在于：所述的PCR扩增反应为Real-time PCR扩增反应。

6.根据权利要求1～5之一所述的检测转cp4-epsps基因大豆及其深加工产品中转基因成份的方法，其特征在于：样品中总DNA是指通过CTAB法，或SDS法，或酶裂解法，或高盐低pH法，或试剂盒法提取。

7.一种实现权利要求1～3之一所述PCR扩增反应的试剂盒，其特征在于：包括A液、B液、C液和D液；其中，A液为PCR反应缓冲液，B液为Taq DNA聚合酶，C液为大豆内源lectin基因上游引物和下游引物，D液为cp4-epsps基因上游引物和下游引物；所述的PCR反应缓冲液内含10×PCR Buffer、dNTPs、MgCl₂和ddH₂O。

8.根据权利要求7所述PCR扩增反应的试剂盒，其特征在于：所述的大豆内源lectin基因上游引物为SEQ ID N_O：1，下游引物为SEQ ID N_O：2；cp4-epsps基因上游引物为SEQ ID N_O：3，下游引物为SEQ ID N_O：4。

9.根据权利要求7所述PCR扩增反应的试剂盒，其特征在于：所述的PCR反应缓冲液中10×PCR buffer、MgCl₂、dNTPs、dd H₂O的体积比为5∶3∶1∶41。

10.根据权利要求7～9之一所述PCR扩增反应的试剂盒，其特征在于：A液为50ml，B液为1ml，C液为2ml，D液为2ml。