[发明专利]一种土拉弗朗西斯菌检测试纸及其制备方法、利用该检测试纸的检测方法和定量检测系统

权利要求书

1.一种土拉弗朗西斯菌检测试纸，其特征在于，该检测试纸包括反应支撑物、紧密连接于反应支撑物上表面中部的硝酸纤维膜，硝酸纤维膜起始端的上表面与吸水垫部分重叠连接、硝酸纤维膜末端的上表面与含有胶体金标记的FopA-S多克隆抗体的金标抗体保护膜部分重叠连接，金标抗体保护膜的上表面部分重叠连接有样品垫，其中，硝酸纤维膜上靠近其起始端处设置有质控抗体包被的质控条带、靠近其末端处设置有兔抗重组FopA-L多克隆抗体检测条带。

2.如权利要求1所述的土拉弗朗西斯菌检测试纸，其特征在于，所述反应支持物为PCV板，吸水垫为滤油纸；所述金标抗体保护膜为玻璃纤维膜、聚脂膜或滤纸纤维。

3.如权利要求1所述的土拉弗朗西斯菌检测试纸，其特征在于，所述样品垫为玻璃纤维膜、聚脂膜或滤纸纤维，其采用含有吐温20的磷酸盐缓冲液进行预处理；所述质控抗体根据金标抗体的免疫源选择为抗兔IgG或者SPA，其优选为羊抗兔IgG。

4.如权利要求1所述的土拉弗朗西斯菌检测试纸，其特征在于，所述试纸整体的外部包裹有外壳，该外壳上对应于所述样品垫处设置有样品孔，外壳上对应于所述质控条带、检测条带处设置有观察窗。

5.一种上述土拉弗朗西斯菌检测试纸的制备方法，其特征在于，该制备方法具体为：

1)制备胶体金：配制浓度为0.01％的HAuCl4水溶液，并调整其pH值为6-8，用PBS稀释抗体至浓度为0.2mg/ml；

2)制备金标抗体保护膜：取步骤1)中制备的胶体金分装于若干个离心管中，每支离心管中抗体量为2-10ug，轻摇混匀后放置；每管中加入10％的BSA100ul，混匀放置；将上面初步制得的胶体金探针进行第一步离心处理，弃上清液；每支离心管中加入1ml重悬液悬浮沉淀后进行第二步离心处理；弃上清液，管底得到暗红色的疏松状沉淀，加入500ul重悬液重悬后进行第三步离心处理，取上清液，均匀滴加在金标抗体保护膜的膜体上，并干燥处理；

3)喷涂硝酸纤维膜：在膜体上喷涂羊抗兔IgG包被的质控条带、兔抗重组FopA-L多克隆抗体检测条带，再将胶体金标记的FopA-S多克隆抗体均匀涂布在膜体上；

4)将反应支撑物、硝酸纤维膜、吸水垫、金标抗体保护膜和样品垫按照试纸结构形式进行组装来制备检测试纸。

6.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中的具体步骤为：磁力搅拌下准确加入1ml 1％的HAuCl4，同时加入1.5-3ml 1％的柠檬酸三钠水溶液，颜色稳定后继续加热，冷却至室温后加纯水至100ml，4℃避光保存；用K₂CO₃调pH值最优为7.0-7.5后，用PBS稀释抗体至0.2mg/ml，并保持胶体金稳定。

7.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中所述第一步离心处理中在12000rpm、4℃下离心30分钟，所述第二步离心处理在12000rpm、4℃下离心30分钟，第三步离心处理在1000rpm、4℃下离心10分钟。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中利用隔流喷金划线机以10-100mm/s的喷膜速度喷涂所述质控条带和检测条带，所述兔抗重组FopA-L多克隆抗体浓度为1-5mg/ml，采用PB稀释液稀释；所述羊抗兔IgG浓度为0.1-5mg/ml。

9.一种利用上述检测试纸快捷检测土拉弗朗西斯菌的方法，其特征在于，该方法具体为：将待测标本与样品稀释液混匀，再将样品混合液加入试纸样品孔处，液体依靠虹吸作用向试纸另一端扩展，待测标本中含有的土拉弗朗西斯菌将与胶体金标记的FopA-S多克隆抗体形成相应的复合物，该复合物与兔抗重组FopA-L多克隆抗体结合，在检测条带处形成红色线条来提示检测到相应的菌类；复合物与羊抗兔IgG形成红色沉淀线，以检验试纸的有效性。

10.一种利用上述检测试纸定量检测土拉弗朗西斯菌的检测系统，其特征在于，该检测系统包括检测试纸和胶体金测试条判读仪，其中检测试纸包括硝酸纤维膜和含有胶体金标记的FopA-S多克隆抗体的金标抗体保护膜，硝酸纤维膜上靠近其起始端处设置有质控抗体包被的质控条带、靠近其末端处设置有兔抗重组FopA-L多克隆抗体检测条带；胶体金测试条判读仪能够判读该试纸条对土拉弗朗西斯菌的检测结果，以实现检测。