[发明专利]一种盘长孢菌的生产工艺

说明书

技术领域

本发明为一种盘长孢菌的生产工艺，适用于生产杀灭寄生性杂草菟丝子的真菌孢子。

背景技术

菟丝子是一种恶性寄生杂草，是国际植物病害检疫对象。世界上共发现200余种菟丝子，在我国发现的有10多种，分布在新疆、宁夏、四川、陕西、内蒙古、山西、河北、山东、江苏、浙江、广东、广西、东北三省、台湾等地区。菟丝子可在棉花、大豆、辣椒、甜菜、西红柿、桂圆、冬青、扶芳藤、榛子、连翘等多种农作物、园艺植物和药用植物上寄生。被寄生的植物轻则减产20-30％，严重的甚至颗粒无收。目前在我国登记的可以杀灭菟丝子的农药只有一种。但是使用农药来杀灭菟丝子，实际使用效果较差，杀灭率低，专一性差，对生产作物有不良影响；而且有农药残留问题，给人体健康和环境带来危害。

发明内容

为克服现有技术的弊端，本发明提供一种对菟丝子具有杀灭专一性强、杀灭彻底、时效长而且对人体和作物无害，不破坏环境的盘长孢菌的生产工艺。本发明的技术方案是：一种盘长孢菌的生产工艺，其特征在于，包括以下步骤：

(1)菌种的制备；制备一级斜面菌种：

土豆培养基制作：用新鲜土豆去皮后称取200克，切成约半厘米见方的小块，加入到1000毫升水中，煮沸后保持沸腾半小时，然后用两层纱布过滤，滤液补足水分到1000毫升，加入葡萄糖20克，搅拌将葡萄糖溶解。然后加入20克琼脂粉，加热将琼脂粉溶解，然后分装到试管中，121℃下高压灭菌20分钟，灭菌后趁热摆成斜面，凝固后即成土豆斜面培养基。

或者采用菟丝子种子培养基：将20克菟丝子种子在800毫升水中煮沸，保持沸腾半小时，然后用两层纱布过滤，其余操作同土豆培养基斜面制作。

斜面长度以占试管的1/3-1/2为宜。在无菌条件下将盘长孢菌接种到斜面上，在25-27℃下避光培养3天。

制备二级液体菌种

菟丝子种子液体培养基配方：粉碎后的菟丝子种子1％，淀粉2％，玉米浆4％，葡萄糖1％，蛋白胨0.1％，硫酸铵1％，碳酸钙0.4％，硫酸镁0.04％，磷酸氢二钾0.1％。加水溶解后分装至三角瓶中，装量为三角瓶容量的1/3到1/5。

将上述培养基在121℃下高压灭菌30分钟，待温度降低到30℃时即可接种。在无菌条件下，将一级斜面菌种用无菌水洗下后倒入三角瓶中，每个斜面菌种可接种3-5个1000毫升的三角瓶。然后在摇床上，以28℃、250转/分钟，避光培养48小时。即为二级液体菌种。制备三级生产用菌种

在发酵罐中制备生产用菌种，发酵罐液体培养基配方：淀粉2％，葡萄糖1％，玉米浆3％，硫酸铵0.3％，蛋白胨0.1％，碳酸钙0.4％，氯化钠0.3％，磷酸氢二钾0.1％，硫酸镁0.03％，豆油0.3％。培养基在121℃高压灭菌30分钟，待培养基温度降低至30℃时，将二级液体菌种以无菌操作接入。接种比例为2％，即每2升二级液体菌种可接种100升生产用液体培养基。发酵罐培养控制参数为：温度28℃，罐压0.5公斤/厘米²，通气量1∶0.5(即1吨的发酵液，通气量为每分钟500升无菌空气)，连续通气培养48小时。

(2)培养基的制备；

(3)将步骤(1)中制备的菌种与步骤(2)中制备的培养基进行混合，并搅拌均匀；

(4)分装到曲盘进行发酵、培养；

(2)至(4)的具体过程如下：将麸皮60％，豆饼面20％，玉米面20％，另加水80％。先将固体原料混合均匀，然后加水混合均匀，分装在透气的棉布袋中，每袋装量不超过5公斤，然后在121℃高压灭菌1小时。待培养基温度降低至30℃时，将三级生产用菌种按10％的比例接种入固体培养基，搅拌均匀，分装在曲盘中，曲盘上先用4层灭过菌的纱布铺底，每盘中所装培养基高度不超过3厘米，上面再盖4层灭过菌的纱布。将曲盘放在发酵间在25-27℃避光培养3天，然后在30℃下避光培养1天。接种后12小时内采用间歇通风，半小时一次，每次10-15分钟。风压控制在10-15毫米水银柱。室内相对湿度95％，料温27℃。接种后12小时到24小时，通风时间逐渐延长，风压控制在40-80毫米水银柱。24小时后，风压控制在120-160毫米水银柱，相对湿度为95％。接种后60-72小时，降低湿度，提高风压，加大风量，促进孢子成熟，料温30℃，相对湿度60-70％。

(5)晾干或者风干：将菌剂在荫凉无阳光直射处晾干，至水分含量在12％以下；或者用鼓风机将菌剂吹干至水分降低到8％以下。

(6)粉碎：使用转速不超过3000转/分钟的粉碎机将晾干的菌剂粉碎。