[发明专利]魔芋神经酰胺的纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种化学物质的纯化方法，具体涉及一种魔芋神经酰胺的纯化方法。

背景技术

神经酰胺是细胞膜的组成部分，具有以下生物功能：1、神经酰胺与糖甙结合形成神经鞘苷，存在于动、植物等真核细胞的细胞膜，参与细胞功能；2.调节细胞生长变异的作用；3.诱导细胞凋亡；4.调节蛋白分泌；5.在炎症中的作用；6.具有良好的保水作用等。在申请号为200910263528.7的中国发明专利申请中，就公开了一种1至5％魔芋神经酰胺。

目前，普遍认为神经酰胺具有抗肿瘤、抗病毒、抗肝毒、保水等医疗和保健作用，因此，神经酰胺被广泛地应用于医药、化妆品领域。尽管神经酰胺在自然界分布十分广泛，但含量很低，再加上其双亲性(既亲水又亲油)，提取非常困难。以前，欧、美等发达国家主要从牛脑、鸡冠等动物组织中提取，并形成了含量3％左右的粗品，用于化妆品作为良好的保湿剂，以及医药原料。由于疯牛病和禽流感的影响，动物来源的神经酰胺的安全性被广泛质疑，许多国家已经明令禁止使用该类产品，到目前为止，市场上基本上没有动物源性的神经酰胺产品。市场急需安全可靠的神经酰胺，来满足制药业和化妆品市场对该类产品的需求。为了满足市场的要求，人们努力寻找安全的神经酰胺，研究方向转向以植物、藻类及微生物等为提取原料，同时还进行人工合成研究。尽管人工合成的产品可以在有限的范围内作替代，但不能真正解决问题。而植物、藻类及微生物等材料，由于其细胞结构的特殊性(与动物细胞相比多了细胞壁)，使得提取难度更大。目前国际国内有关于从小麦的麸皮、酵母细胞、海藻以及其他植物中能提取出神经酰胺的报道，并对其结构、分子量进行了鉴定。但由于神经酰胺含量非常低，提取成本非常高，尚无有商业意义的产品形成。

发明内容

本发明提供了一种从魔芋中提取出的神经酰胺粗产品的纯化方法。

本发明是这样实现的：

步骤(1)采用不同极性的溶剂作为萃取剂；

步骤(2)采用硅胶柱层析分两次纯化：采用干法上样，有机溶剂梯度洗脱，分第一次硅胶柱层析和第二次硅胶柱层析两次柱层析，纯化神经酰胺。

更进一步的技术方案是步骤(1)所述萃取剂为石油醚和乙酸乙酯，石油醚沸程为30至60℃，石油醚和乙酸乙酯均为分析纯。

更进一步的技术方案是步骤(2)所述梯度洗脱有机溶液为：石油醚、乙酸乙酯及甲醇，均为分析纯。

更进一步的技术方案是步骤(2)中所述第一次硅胶柱层析时洗脱液梯度变化为：石油醚∶乙酸乙酯为9∶1至1∶9体积比，乙酸乙酯∶甲醇为9∶1至3∶7体积比。

更进一步的技术方案是步骤(2)所述第一次硅胶柱层析纯化时，神经酰胺粗品于洗脱液为乙酸乙酯∶甲醇为2∶8至5∶5体积比时收集得到。

更进一步的技术方案是步骤(2)第一次硅胶柱层析收集得到的神经酰胺粗品经第二次硅胶柱层析进一步纯化，洗脱液梯度变化为石油醚∶乙酸乙酯为9∶1至1∶9体积比，乙酸乙酯∶甲醇为9∶1至3∶7体积比。

更进一步的技术方案是步骤(2)所述第二次硅胶柱层析纯化时，神经酰胺洗脱液为乙酸乙酯∶甲醇为2∶8至5∶5体积比时收集得到。

本发明提供了从魔芋中提取出的神经酰胺粗产品的纯化方法，可以将魔芋神经酰胺进行提纯，将其纯度提高到50％(wt)以上，从而可以获得更大的用途。

具体实施方式

一种魔芋神经酰胺的纯化方法，是对专利申请号为200910263528.7的发明专利申请中得到的含1至5％魔芋神经酰胺的产品进行纯化的方法，包括如下步骤：

(1)将魔芋粗提液依次用石油醚，乙酸乙酯萃取，合并提取液，减压浓缩至浸膏状。经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，洗脱液流速为2.5ml/min，每25ml收集一次，TLC点板，合并同类物，体系在乙酸乙酯至甲醇(2∶8-5∶5，体积比)收集的组分，静置后析出白色絮状物，离心收集，得白色无定形粉末状物质，为组分I，其纯度约为30％(wt)。。

(2)组分Ⅰ的柱层析分离

组分Ⅰ，经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙醋-甲醇梯度洗脱，洗脱液流速为2.5ml/min，每20ml收集一次，TLC点板，合并，乙酸乙醋至甲醇(2∶8，体积比)收集得组分Ⅱ，其纯度约为50％以上(wt)。。

经过HR至ESI至MS，¹HNMR ¹³CNMRHMBC ¹H至¹H COSY，乙酰化，甲醇水解GC至MS分析，可知组分Ⅱ为神经酰胺类物质-脑苷脂混合物。