[发明专利]一种用HPLC指纹图谱鉴别铁皮石斛真伪的方法

权利要求书

1.一种用HPLC指纹图谱鉴别铁皮石斛真伪的方法，步骤如下：

(1)供试品的制备：将不同石斛药材干燥，粉碎后过筛，精密称取药材粉末，加水或一元醇提取，浓缩到一定体积，有机溶剂萃取，回收，甲醇定容，微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液；

(2)铁皮石斛药材HPLC指纹图谱的建立：色谱分离柱为反相G₁₈柱；流动相为乙腈/甲醇-酸水，梯度洗脱；检测波长270±20nm；柱温25～40℃；在此条件下分析供试品溶液，得到铁皮石斛药材指纹图谱；

(3)标准指纹图谱的建立：对20批铁皮石斛药材建立了HPLC指纹图谱，通过分析比较，得到铁皮石斛标准指纹图谱和铁皮石斛药材相似度；

(4)以上述相同的步骤测定待测铁皮石斛样品和铁皮石斛伪品/代用品的指纹图谱；

(5)将待测铁皮石斛样品和铁皮石斛伪品/代用品的指纹图谱与标准指纹图谱比较，计算相似度，确定样品真伪。

2.根据权利要求1所述的一种用HPLC指纹图谱鉴别铁皮石斛真伪的方法，其特征在于步骤(1)所述的：

1)药材粉碎后过筛是过30～200目筛；

2)精密称取铁皮石斛药材，按1∶20～1∶100的比例(以干品计)加提取溶剂提取0.5～3h，提取液减压回收至一定体积；提取溶剂为水或一元醇或两种溶剂按一定配比的混合溶剂；

3)石斛药材是指不同生长年限或不同产地的鲜品、干燥品及枫斗；

4)提取方式是指回流提取、超声提取、索式提取、加速溶剂提取和微波提取；

5)用等体积的有机溶剂萃取2～5次，有机溶剂可以为：乙醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取、氯仿等或上述溶剂按一定配比的混合溶剂系统。

3.根据权利要求1所述的一种用HPLC指纹图谱鉴别铁皮石斛真伪的方法，其特征在于步骤(2)所述的：

1)流动相为乙腈/甲醇-酸水，酸可为有机酸如甲酸、乙酸或无机酸如磷酸，浓度为0.1-0.5％，优选甲醇-磷酸，磷酸浓度优选0.2％；

2)流动相梯度洗脱条件为：0min→5min→10min→25min→45min→60min→75min；甲醇25％→25％→30％→40％→55％→70％→100％；流速0.8-1.2mL/min；

3)检测波长270±20nm，优选280nm；

4)柱温是25～40℃，优选30～35℃。

4.根据权利要求1所述的一种用HPLC指纹图谱鉴别铁皮石斛真伪的方法，其特征在于步骤(3)所述的：

按照本发明提供的方法，对20批铁皮石斛药材建立HPLC指纹图谱，通过分析比较，得到铁皮石斛标准指纹图谱和铁皮石斛药材相似度，20批铁皮石斛相似度均在0.8以上。

5.根据权利要求1所述的一种用HPLC指纹图谱鉴别铁皮石斛真伪的方法，其特征在于步骤(4)和步骤(5)所述的铁皮石斛伪品/代用品指：

报春石斛、齿瓣石斛、大包鞘石斛、叠鞘石斛、兜唇石斛、钩状石斛、鼓槌石斛、金钗石斛、晶帽石斛、玫瑰石斛、美花石斛、密花石斛、梳唇石斛、疏花石斛、束花石斛、细茎石斛、肿节石斛、马鞭石斛、重唇石斛、黄花石斛、霍山石斛、刀叶石斛、广东石豆兰、细叶石仙桃等，其与铁皮石斛标准指纹图谱比较，其相似度均在0.6以下。