[发明专利]以叶片为外植体的月季再生植株的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组织与细胞培养技术领域，具体涉及以月季叶片为外植体，通过体细胞胚发生途径进行月季植株再生的方法。

背景技术

月季(Rosa hybrida)属于蔷薇科(Rosaceae)蔷薇属(Rosa)多年生常绿木本植物。月季栽培历史悠久，被世界各国广泛种植，是非常重要的观赏花卉且具有重要的商业价值，在园林绿化中起着重要的作用。月季因其姿态优美、花色丰富艳丽，芳香浓郁、花期长、适应性强、繁殖容易且管理方便被誉为花中皇后。月季的用途非常广泛，例如可以用藤本月季布置长廊和拱门，用树状月季装饰主干道，将灌木月季做成绿篱，用聚花月季点缀花坛，茶香月季可以用于展览，微型月季用来作为室内陈设，切花月季可以应用于各种场所。

但是月季花的瓶插寿命比较短，易患白粉病、黑斑病，这些都影响了它的观赏价值和经济价值。在这些性状改良上，传统育种方法存在着很大的局限性。植物基因工程技术在保持品种的其他性状相对稳定的基础上，能够利用外源基因对其所控制的性状进行定向改良，从而为培育月季新品种提供了新的途径。而月季再生体系和遗传转化体系的建立是利用基因工程技术育种的重要基础。

植物的体细胞胚发生是植物的体细胞在离体条件下，通过与合子胚类似的发育途径得到新个体的过程。体细胞胚发生途径再生体系的建立有助于月季的试管苗快繁，人工种子的生产和冷藏保存，同时胚性细胞是进行月季遗传转化的最佳受体，可以以体细胞胚为受体进行月季遗传转化的研究。

不同的月季品种和外植体及实验方法被应用于月季体细胞胚发生的研究，结果表明由于基因型的限制很难找到一种通用的方法进行月季体细胞胚的诱导(Marchant et al.，Somatic embryogenesis and plant regeneration in floribunda rose(Rosa hybrida L.cvs.Trumpeter and Glad Tidings).Plant Science，1996，120：95-105)。以月季Rosa hybrida cv.Carl Red和R.canina的离体叶片或茎段为外植体可以获得胚性愈伤组织(Visessuwan et al.，Plant regeneration systems from leaf segment culture through embryogenic callus formation of Rosa hybrida and R.canina.Breed Sci，1997，47：217-222)。DeWit et al.(Somatic embryogenesis and regeneration of flowering plants in rose.Plant Cell Rep，1990，9：456-458)以R.hybrida cv.Domingo和R.hybrida cv.Vicky Brown的叶片为外植体也获得了胚性愈伤组织。Rout et al.(Somatic embryogenesis in callus culture of Rosa hybrida L.cv.Landora.Plant Cell Tiss Org Cult，1997，27：65-69)在月季R.hybrida cv.Landora体细胞胚诱导研究中，诱导未成熟的叶片或茎段可以获得体细胞胚。Marchant et al.(Somatic embryogenesis and plant regeneration in floribunda rose(Rosa hybrida L.cvs.Trumpeter and Glad Tidings).Plant Science，1996，120：95-105)以月季R.hybrida cv.Trumpeter和R.hybrida cv.Glad Tidings的叶柄和根为外植体诱导得到了体细胞胚。利用未成熟种子诱导得到体细胞胚(Kim et al.，Control of direct and indirect somatic embryogenesis by exogenous growth regulators in immature zygotic embryo cultures of rose.Plant Cell Tiss Org Cult，2003，74：61-66；Kamo et al.，Dispersal and size fractionation of embryogenic of callus increases the frequency of embryo maturation and conversion in hybrid tea roses.Plant Cell Rep，2004，22：787-792)。此外，体细胞胚可以通过诱导月季的花瓣获得(Arene et al.，A comparison of the somaclonal variation level of Rosa hybrida L.cv.Meirutral plants regenerated from callus of direct induction from different vegetative and embryonic tissues.Euphytica，1993，71：83-90)。目前，国内外还没有关于月季‘萨蔓莎’体细胞胚诱导的报道。