[发明专利]一种抗病毒药物活性检测方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于药物药性检测方法技术领域，具体涉及一种抗病毒药物活性检测方法的建立及应用。

背景技术

随着医药领域的发展，为了安全用药避免药物中毒，人们对于药物的有效部位以及这些有效部位在治疗疾病中的应用越来越重视。目前针对治疗某种疾病的药物有效部位以及药物用量的检测方法通常采用的是先培养病毒微生物或者病毒细胞，使其在培养基等可见载体表面产生一定的宏观表象，然后再将待测药物通过物化手段加入病毒微生物或者病毒细胞的生活环境中，从而对病毒的繁殖或者生长起到一定的阻止作用，由于待测药物的加入会影响加入药物的载体表面产生的宏观表象，产生不同的表象，研究人员通过这种差异来检测药物不同部位所具有的不同的药效以及药物用量对治疗的影响。

目前检测病毒的技术主要有：(1)、电子显微镜观察，(2)、细胞病变法，(3)、染色法，(4)、酶免疫测定，(5)、病毒蛋白的印迹杂交实验，(6)、PCR技术，但是上述技术各自有各自的缺陷，例如：

(1)、电子显微镜观察：虽然电镜可直观病毒存在，是诊断病毒病的重要工具。但机器价格昂贵，技术要求高，不太适用于常规病毒学诊断试验或大量标本的检测；病毒量较大时才易得到阳性结果，应用范围有限，且不能鉴别病毒的血清类型；

(2)、细胞病变法：通过检测细胞病变效应(cytopathic effect，CPE)、病毒蚀斑形成或病毒的产量被抑制程度，间接反映IFN的生物学活性。但是不是每种病毒在细胞培养中都能产生细胞病变，并且CPE判定主观性强，准确性差，不适于准确计算病毒感染力及判断药物抗病毒活性。

因此急需一种新的检测药物活性的方法来达到简单、易用、准确检测的目的。

流行性腮腺炎简称流腮，是儿童和青少年中常见的呼吸道传染病，由腮腺炎病毒所引起。临床特征为发热及腮腺非化脓性肿痛，并可侵犯各种腺组织或神经系统及肝、肾、心脏、关节等器官。流腮病毒是单股的核糖核酸病毒，属于副粘液病毒类，含核糖核酸、蛋白质、碳水化合物和类脂，对腺体和神经组织易亲和。由于流腮病毒对儿童和青少年的的危害性，因此研究各种药物对流腮病毒的有效部位，对减少儿童和青少年服用的药物具有积极的意义。

发明内容

生长热力学理论认为，任何物理/化学反应发生时，均伴随能量的转移和热变化，而这些能量转移和热变化均可用热力学的理论和方法加以刻画和分析。生物热动力学就是研究生命体新陈代谢过程中能量转移和热变化，其基本内涵就是将生命体(机体、微生物、细胞)的能量代谢等过程以热动力学函数的形式加以表征。

本发明的目的是为了解决上述病毒检测方法中的不足，以生长热力学理论为基础，公开了一种以热力学变化为原理的药物活性检测方法。

本发明药物活性检测方法的技术方案具体如下：

一种抗病毒药物活性检测方法，包括下述步骤：

(1)、选取与待检药物治疗适应症对应的微生物或细胞；

(2)、向步骤(1)中选取的微生物或细胞中加入待检药物，进行培养；

(3)、将加入了待检药物的微生物或细胞置于微量量热仪中，得到微生物或细胞生长代谢的热谱曲线，根据热谱曲线的斜率和最大发热功率参数评价药物活性大小。

上述技术方案中所述的抗病毒药物活性检测方法，其中，步骤(2)中所述的待检药物为提取的待检药物活性成分。

上述技术方案中所述的抗病毒药物活性检测方法，其中，在所述的步骤(1)和步骤(2)之前还包括待检药物对微生物或细胞的毒性测定步骤。

上述技术方案中所述的抗病毒药物活性检测方法，其中，所述的待检药物对微生物或细胞的毒性测定步骤是指向相同细胞浓度的微生物或细胞中加入不同浓度的待检药物，然后与正常微生物或细胞对照观察细胞病变情况，按Reed-Muench法计算半数有毒浓度和最大无毒浓度。

另外由于流腮病毒对儿童和青少年的危害，本发明的另一个目的在于公开了上述检测方法在检测板蓝根治疗流腮病毒有效部位的应用。

上述检测方法在检测板蓝根治疗流腮病毒有效部位的应用的技术方案具体如下：

上述技术方案中所述的检测方法在测定板蓝根清热解毒活性中的应用，包括下述步骤：

(1)、选择板蓝根清热解毒活性适应症对应的流腮病毒；

(2)、取37℃，5％CO₂培养24h后的Hela细胞，加入100TCID₅₀的流腮病毒液对Hela细胞进行转染；