[发明专利]铅离子抗原及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种制备铅离子抗原的方法，包括如下步骤：

1)将螯合剂溶解于酸的水溶液中，再向其中加入亚硝酸盐水溶液，进行重氮化反应，得到重氮化的螯合剂；

2)将步骤1)得到的重氮化的螯合剂和载体蛋白溶液混合，进行偶联反应，得到所述螯合剂与载体蛋白的偶联物；

3)将步骤2)得到的所述螯合剂与载体蛋白的偶联物与铅离子的溶液混合，进行络合反应，得到螯合剂与载体蛋白的偶联物与铅离子形成的络合物，即得到铅离子抗原。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤1)中，所述螯合剂、所述酸和所述亚硝酸盐的投料配比为2.5mg∶2.5×10^-4mol∶0.7×10^-5mol；

步骤2)中，所述重氮化螯合剂和所述载体蛋白的投料摩尔比为12∶1；

步骤3)中，所述偶联物与所述铅离子的投料摩尔比为1∶12。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步骤1)中，所述重氮化反应的条件为：反应温度为0℃，避光，反应时间为15min；

步骤2)中，所述偶联反应的条件为：反应温度为4℃，PH为7.5，避光，反应时间为8h；

在步骤3)中，所述络合反应的条件为：反应温度为25℃，pH值为7.5，反应时间为12h。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：

步骤1)中，所述螯合剂为对氨基苄基乙二胺四乙酸；所述亚硝酸盐水溶液中的亚硝酸盐为亚硝酸钠，所述酸的水溶液中的酸为盐酸、硫酸、硝酸或硼酸；

在步骤2)中，所述载体蛋白溶液按照如下方法制备：将载体蛋白溶解到缓冲液中得到所述载体蛋白溶液；所述缓冲液为碳酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液，所述缓冲液的pH值为9.6；所述载体蛋白为牛血清白蛋白或卵清白蛋白；

在步骤3)中，所述铅离子的溶液为硝酸铅水溶液。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述络合反应后，包括将络合反应产物进行透析得到铅离子抗原的步骤。

6.由权利要求1-5中任一所述方法制备得到的铅离子抗原。

7.一种铅离子抗原，是重氮化的螯合剂与载体蛋白通过共价键连接形成的偶联物再与铅离子通过配位键连接形成的络合物；所述重氮化的螯合剂的结构式如下：

；所述载体蛋白为牛血清白蛋白或卵清白蛋白。

8.由权利要求6或7所述铅离子抗原制备得到的抗体。

9.权利要求6或7所述铅离子抗原和/或权利要求8中所述抗体在检测样品中铅离子中的应用；

权利要求6或7所述铅离子抗原和/或权利要求8中所述抗体在制备用于检测样品中铅离子的酶联免疫试剂盒中的应用；

权利要求6或7所述铅离子抗原和/或权利要求8中所述抗体在制备用于检测样品中铅离子的发光免疫试剂盒中的应用；

权利要求6或7所述铅离子抗原和/或权利要求8中所述抗体在制备用于检测样品中铅离子的免疫亲和色谱柱中的应用；

所述样品为水体、食品或土壤。