[发明专利]促进皮肤伤口无疤痕愈合的siRNA及应用

说明书

技术领域

本发明涉及促进皮肤伤口无疤痕愈合的siRNA分子、靶向多个伤口无疤痕愈合相关基因的多个siRNA分子的鸡尾酒组合、以siRNA分子或者其鸡尾酒组合作为有效成分的药物组合物。

背景技术

皮肤是机体最大的器官，由下层的内皮层(真皮)和外部的上皮层(表皮)组成，皮肤的基本功能是机体对外界环境的保护屏障。当机体皮肤的完整性由于受伤或疾病而大面积缺损后，可因其主要屏障功能的丧失而导致机体死亡。在美国，每年有超过125万烧伤患者和650万因挤压、静脉淤滞或糖尿病引起的慢性皮肤溃疡患者。伤口治疗的首要目标是快速的愈合并恢复功能，同时尽量减少疤痕面积、恢复美观。近期细胞和分子生物学发展迅猛，极大增强了我们对伤口修复和组织再生的生物学过程的理解，也提升了伤口护理的水平。

伤口修复：皮肤损伤的快速反应

受伤后组织恢复完整性的过程，是一项系统发育过程中形成的基本而重要的功能，也是宿主的天然免疫反应过程。高等脊椎动物的组织重构能力不如低等脊椎动物，后者组织损坏后还能重构，而前者快速修复后会形成纤维化的疤痕。无论是创伤、微生物感染或外来物质造成的损伤，均会发生一系列事件，包括凝结、炎症、上皮再生、形成肉芽组织、基质和组织重塑等，这些事件在时间先后上有部分重叠。修复过程主要是由细胞因子等信号分子相互作用来介导的，这种相互作用以多级放大的模式来激活和调节细胞活性。一般通过人工构建模拟皮肤损伤过程的皮肤伤口模型来研究受伤后的反应。凝结反应发生在损伤初期，随后是局部的急性炎症反应，接着间叶细胞富集、增殖，基质合成。炎症处理不当将导致慢性不愈的伤口、不可控制的基质累积(经常通过各种细胞因子通路)，从而导致额外的疤痕和纤维化等后遗症。细胞因子的功能鉴别方面的不断进步，为探索通过抑制/增强细胞因子来控制或调节病理修复过程提供了可能性。

胚胎伤口的无疤痕快速愈合

伤口愈合是一个动态的相互作用过程，涉及可溶性介质、血细胞、细胞间质和实质细胞。伤口愈合过程包括在时间先后上有重叠的三个阶段——炎症、组织形成和组织重塑。在胚胎皮肤形成阶段，单细胞繁殖形成基底层后产生的角质细胞，经生长停滞期后，在分化程序的严格控制下由下向上迁移成为形态学完全不同的表皮层。使用类似的程序，表皮在有机体的整个生命过程中不断更新。表皮形成后，成年哺乳动物皮肤也有快速修复损伤的能力。然而，如果追求快速伤口愈合和防止感染，则会导致伤口愈合不完美，常伴有表皮层和真皮层的疤痕出现。

相对于成年人的皮肤伤口修复，妊娠早期胎儿的伤口是通过再生过程修复的，其真皮和表皮能够进行完美的无疤痕重建。与成年人相比，胎儿伤口在修复上有下述几点显著差异：胎儿伤口修复得比较快，并且很少或者不出现炎症反应，其细胞因子/生长因子表达谱不同，表达量通常是较低的。

TGF-β抗体可部分地减少疤痕形成量

有大量证据表明伤口修复受细胞因子、生长因子及其它们的受体等一系列因子的调节(5-7)。这些调节因子通过一种复杂但有序的模式影响细胞的迁移、生长和增生，同时与嗜中性白细胞及巨噬细胞的浸润、血管生成、纤维素增生、基质沉积、伤疤形成和表皮再植等有关。在伤口修复过程中，除了血小板与巨噬细胞，成纤维细胞是细胞因子或生长因子的主要来源。早期妊娠胎儿皮肤伤口的无疤痕修复主要是特定的细胞因子或生长因子作用的结果。

在众多因子中，转化生长因子β(TGF-β)在皮肤伤口愈合过程中的作用已经得到广泛研究，对疤痕的形成起着重要的作用。TGF-β的主要功能是调控细胞增殖和分化，刺激细胞外基质如胶原的合成。在正常无疤痕胎儿的伤口中外源添加TGF-β可导致疤痕形成，同时还观察到类似于成年人的炎症反应。在成年鼠皮肤伤口使用TGF-β抗体中和能导致伤口部位疤痕数量的部分地减少，表明TGF-β具有促纤维化的特性。TGF-β刺激产生的Ⅰ型胶原是成年机体皮肤主要的胶原类型。但另一方面，TGF-β中和抗体并不能完全阻止成人皮肤疤痕形成，因而近期有一些研究对最为主要的疤痕形成因子的TGF-β的功能提出了质疑(8-15)。