[发明专利]一种抗重金属汞离子抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗重金属汞离子抗体及其应用。

背景技术

近年来，重金属污染事件层出不穷、愈演愈烈，人类赖以生存的空气、土壤、蔬菜和动物均受到了重金属等毒物的污染。环境污染和饲料药物添加剂的滥用，造成畜禽产品重金属残留不同程度超标(逄瑞玥.我国畜禽产品质量安全存在的问题及应对策略.黑龙江粮食，2007，(4)：20-22)。作物中积累的重金属离子通过食物链的生物放大作用进入人畜体内，威胁人畜健康(郎明林，张玉秀，柴团耀.基因工程改良植物重金属抗性与富集能力的研究进展.生物工程学报，2004，20(2)：157-164)。汞是蓄积作用较强的元素，主要在动物体内蓄积。湖泊、沼泽中的水生植物、水产品易蓄积大量的汞。后期，农业上使用含汞杀螨剂以来，汞对土壤、自然水系和大气的污染日益严重。汞污染在世界的某些地方，已成为大众健康的公害(梅光泉.重金属废水的危害及治理.微量元素与健康研究，2004，21(4)：54-56)。快速灵敏地检测食物中的重金属含量是保障食品安全的基础，传统检测重金属残留的分析方法包括原子吸收光谱分析(Atomic Absorption Spectroscopy，AAS)和电感耦合等离子发射光谱(Inductively Coupled Plasma Atomic Emission Spectroscopy，ICP-AES)等是灵敏、可靠的(Bontidean I，Lloyd JR，Hobman JL，et al.Bacterial metal-resistance proteins and their use in biosensors for the detection of bioavailable heavy metals.J Inorg Biochemy，2000，79(1-4)：225-229.)。但昂贵的仪器、专业的分析人员及复杂的样品前处理限制了这些方法的应用。检测必须在具备大型分析仪器的重点实验室内进行，无法用于现场检测，而且受到费用高、处理量有限和检测时间长等限制(刘功良，王菊芳.重金属离子的免疫检测研究进展.生物工程学报，2006，22(6)：877-881)。传统的重金属检测方法不适合蔬菜、水果等保鲜期短、利润低和需大通量检测的样品。

对重金属的常规性检测方法已经有很多种，有些也已经是非常成熟的技术，但因为重金属离子存在的范围很广，根据检测精度、方便程度和检测成本，每种技术都有它们的局限性，同时还需合适的场所，因此都不利于在生产中推广应用。建立更快速、更经济的免疫分析法检测汞离子是生产及经济发展的需要。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗重金属汞离子抗体及其应用

本发明提供的抗重金属汞离子抗体为杂交瘤细胞株H2H5 CCTCC №.C200948分泌的单克隆抗体。

杂交瘤细胞株H2H5 CCTCC №.C200948也属于本发明保护的范围，已于2009年7月8日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址为：湖北省武汉市武汉大学)，保藏登记号为CCTCC №.C200948。

杂交瘤细胞株H2H5 CCTCC №.C200948或其分泌的单克隆抗体在汞离子免疫检测中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明提供的杂交瘤细胞株H2H5 CCTCC №.C200948分泌的单克隆抗体为特异性单克隆抗体。其制备过程因Hg²⁺离子太小以至于不能引起免疫反应，所以用螯合剂(二乙烯三胺五乙酸，DTPA)将金属离子与载体蛋白(匙孔血蓝蛋白，KLH)连接起来。成功合成、鉴定汞复合物抗原后，免疫BALB/c小鼠，通过细胞融合获得了稳定分泌抗体的杂交瘤细胞。用极限稀释法亚克隆，通过ELISA筛选，最终获得了稳定分泌抗汞离子抗体的细胞株(H2H5)。小鼠腹腔注射1×10⁷H2H5细胞株制备腹水，腹水抗体效价在1∶51200以上。经鉴定杂交瘤为IgG1亚类，轻链为kappa型且分泌抗体稳定性较好。杂交瘤细胞株H2H5 CCTCC №.C200948分泌的单克隆抗体为汞离子残留免疫学检测方法的建立提供了技术基础，对提高风险评估工作的效率和质量，保障食品安全有重要现实意义。

本发明的金属汞离子螯合物的单克隆抗体的获得，为汞离子残留免疫学检测方法的建立打下了基础。可以利用上述单克隆抗体，研究和建立重金属的免疫学检测方法。并利用其快速、廉价、灵敏和特异性强的优点，发展便于现场检测的便携方法，从而适用于农畜产品的抽样检测及进出口通关的快速检验。对提高风险评估工作的效率和质量，保障食品安全有重要现实意义。

附图说明