[发明专利]用于心肌梗死动物中自体脂肪干细胞移植模型构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及动物模型技术领域，是一种用于心肌梗死动物中自体脂肪干细胞移植模型构建方法。

背景技术

缺血性心脏疾病——心脏肌肉供血不足——是世界的首要死亡原因，包括大多数低收入和中等收入国家。对于缺血性心脏病，现今的治疗策略包括恢复心脏再灌注和药物改善慢性疾病症状，而干细胞和祖细胞的发现对治疗缺血性心脏病已经变革了实验研究并引领了对临床研究的探索。近来脂肪源干细胞成为其热点之一，然而，大多数动物实验均基于同种异体的脂肪干细胞治疗心脏缺血性疾病。如Katja、Gwak等的研究，究其原因，很大一部分是自体脂肪干细胞治疗缺血性疾病的动物模型尚未成熟，众所周知，由于细胞来源于自身，这将从根本上解决同种异体器官移植中免疫排斥问题，也从根本上解决供体来源不足的问题。故自体干细胞移植的意义比异体移植大很多，因此备受人们的关注和重视。

有研究者认为，由于脂肪干细胞具有来源丰富，收集细胞量大、患者易于接受、细胞分离简单等众多优点，有可能会成为继骨髓间充质干细胞之后下一个运用于临床的干细胞，然而，目前关于脂肪干细胞治疗的研究仍处在探索阶段，这些研究许多是基于移植大鼠同种异体的脂肪干细胞于心脏梗死区域，究其原因很大一部分是由于大鼠自体脂肪干细胞移植治疗心肌梗死的动物模型的建立尚不成熟，鉴于上述原因，大鼠自体脂肪干细胞治疗心肌梗死的动物模型是十分有必要的。尤其是在21世纪，干细胞移植治疗缺血性疾病的研究方兴未艾，作为治疗缺血性疾病的动物实验平台，大鼠自体脂肪干细胞治疗心肌梗死疾病模型的建立将发挥重大的科研价值。

发明内容

本发明提供了一种可用于大鼠心肌梗死的动物模型中自体脂肪干细胞移植的模型构建方法，克服了上述现有技术存在的问题，其具有廉价易得，操作简单，心梗成功率高，效果可靠等优点。

本发明的技术方案是通过以下措施来实现的：一种用于心肌梗死动物中自体脂肪干细胞移植模型构建方法，其按下述步骤进行：

步骤一：2%戊巴比妥钠、10%水合氯醛、阿托品按3﹕2﹕1体积比例混合配置成麻醉复合溶液；

  步骤二：分别从大鼠腹股沟及肩胛骨提取大鼠自体脂肪，其具体步骤如下：

将上述麻醉复合液进行腹腔注射，腹股沟组大鼠以第二乳头为标志向下至大鼠膝关节备皮，固定于大鼠手术板，75%酒精消毒备皮区域后移至超净台紫外线照射30分钟，遮蔽双眼，医用碘伏消毒手术区域，沿腹股沟中点行X型开口，眼科镊及眼科剪配合提取脂肪，操作完成后缝合皮肤；肩胛骨组以第二乳头为标志向头部方向备皮至颈部，采用T型切口提取脂肪，眼科镊及眼科剪配合提取脂肪，操作完成后缝合皮肤；术后腹腔注射40U青霉素预防感染；

步骤三：大鼠心肌梗死模型的建立：

3周后，运用上述复合麻醉剂腹腔注射麻醉后连接标准导联心电图检测，胸部及颈部备皮75%酒精常规消毒铺巾，颈部正中横切口，行气管切开术并插管，缝合线固定后连接小动物呼吸机，以第二乳头为标志纵行切开皮肤，钝性分离各层组织直至第3肋下缘，小动物扩胸器撑开3、4肋间肌，充分暴露心脏，剪开心包，于肺动脉圆锥和左心耳之间，以左冠状动脉主干为标志，于左心耳根部下方2-3mm处进针，深度为0.5mm左右，6/0缝合针穿过心肌表层，肺动脉圆锥旁出针，小心结扎左冠状动脉前降支LAD；逐层缝合，术毕腹腔注射40U青霉素预防感染。

对上述本发明的技术方案可进一步进行如下的选择或/和优化：

在上述步骤三中，所述的大鼠心肌梗死是急性心肌梗死或是陈旧性心肌梗死。

上述模型是多种心脏缺血性疾病模型及再生医学相关领域动物模型。

本发明具有以下优点：1、提取大鼠自体脂肪组织，根本上解决同种异体器官移植中免疫排斥问题；2、具有操作简单，大鼠存活率较高，心梗成功率高，效果可靠等优点，可作为小动物自体脂肪干细胞移植治疗心脏缺血性疾病的研究模型，适用于细胞移植和再生医学领域。本发明首次成功建立了大鼠自体脂肪干细胞治疗心肌梗死动物模型，可进一步用于脂肪干细胞在大鼠心肌梗死模型方面的研究，甚至对各相关领域研究均能起到积极影响。对人自体干细胞移植治疗心肌梗死疾病的临床开展具有一定指导意义。

附图说明

附图1为本发明的相差显微镜下P2代脂肪干细胞（200X）图。