[发明专利]一种高效诱导微拟球藻脂肪积累的培养方法

权利要求书

1.一种微拟球藻-X57的培养基，其配方为：

氯化钠     18.0-40.0g/L    硝酸钠           120.0-220.0mg/L

三氯化铁   2.5-6.5mg/L     乙二胺四乙酸二钠 1.0-6.0mg/L

磷酸二氢钠 7.0-18.0mg/L    微量元素         0.5-2.0ml/L

其中微量元素的配制方法为：

硫酸铜   5.5-22.5mg/L     硫酸锌    14.0-56.5mg/L

氯化钴   11.5-45.5mg/L    氯化锰    113.5-453.0mg/L

加蒸馏水至1L

日常添加营养液母液的配制方法：

溶液A：

硝酸钠     280-320g/L    微量元素    0.5-2ml/L

其中微量元素配方为：

硫酸铜    1-3g/L    硫酸锌    4-6g/L

氯化钴    3-5g/L    氯化锰    30-50g/L

加水定容至1L。

溶液B：

磷酸二氢钠  180-220g/L

溶液C：

三氯化铁    6-10g/L    乙二胺四乙酸二钠  4-9g/L。

2.如权利要求1所述的微拟球藻-X57的培养基，其较好的配方为：

氯化钠        20.0-35.0g/L    硝酸钠           150.0-200.0mg/L

三氯化铁      3.5-5.5mg/L     乙二胺四乙酸二钠 2.0-3.5mg/L

磷酸二氢钠    9.0-14.0mg/L    微量元素         0.5-2.0ml/L

其中微量元素的配制方法为：

硫酸铜    9.0-15.0mg/L    硫酸锌    19.5-32.5mg/L

氯化钴    14.5-28.0mg/L    氯化锰    190.5-265.0mg/L

加蒸馏水至1L。

3.一种诱导如权利要求1所述的微拟球藻-X57脂肪积累的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)配制培养基以及日常添加的营养液母液A、B、C；

(2)将微拟球藻-X57与培养基按1∶5-1∶10的体积比接种，每天向微藻培养液中加入营养液母液A、B、C的混合液，培养5-8天，此过程是微拟球藻-X57积累生物量的阶段；

(3)使用超声仪对生物量积累后的微拟球藻-X57培养液进行超声处理，然后向微藻培养液中通入CO₂、由于加入到微拟球藻-X57培养液中的营养液母液A∶B的浓度需降低，母液C的浓度需增加，因此分别加入营养液母液A∶B的混合液和母液C进行诱导脂肪积累的培养。

4.如权利要求3所述的诱导微拟球藻-X57脂肪积累的方法，其特征在于微拟球藻-X57是在温度为18-30℃，pH值为6-9，光照为5000-250001ux，光照时间为10-16小时/天的条件下进行生物量的积累，溶液A∶B∶C按照10∶1∶10-25∶1∶25的比例混合，加入量为每天0.6-2ml/L。

5.如权利要求4所述的诱导微拟球藻-X57脂肪积累的方法，其特征在于较好的生物量积累条件为：培养温度22-28℃、pH值7-8、光照12000-200001ux、光照时间11-14小时/天，营养液母液A、B、C比例为12∶1∶12-20∶1∶20，每天加入量为0.6-1.5ml/L，培养6-8天。

6.如权利要求4所述的诱导微拟球藻-X57脂肪积累的方法，其特征在于最好的生物量积累条件为：营养液母液A、B、C比例为18∶1∶18，每天加入量为0.8ml/L，培养8天。

7.如权利要求3所述的诱导微拟球藻-X57脂肪积累的方法，其特征在于

进行超声处理时的频率为15-35kHz，功率为2-8w，处理1-3次，每次间隔为10s，处理时间为10-60s/次，再向微藻培养液通入CO₂、并加入营养液母液A∶B及C的条件下，诱导培养2天，再以10-20kHz的频率，1-5w的功率，处理1-2次，每次间隔10s，处理5-15s/次，共诱导培养4天。