[发明专利]一种新型传染病核酸快速检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种新型传染病核酸快速检测试剂盒，其特征在于，所述快速检测试剂盒包括：

无仪器微量核酸提取试剂盒、核酸恒温扩增反应试剂盒和防污染核酸快速检测装置。

2.根据权利要求1所述的新型传染病核酸快速检测试剂盒，其特征在于，所述的无仪器微量核酸提取试剂盒包括：微核酸提取装置、一次性注射器、细胞裂解液、清洗液及洗脱液。

3.根据权利要求2所述的新型传染病核酸快速检测试剂盒，其特征在于，所述的微量核酸提取装置包括管状主体(1)，管状主体一端设有用于与一次性注射器连接的接头(2)，另一端为插头(3)，用于与核酸结合的滤芯装置(4)安装于管状主体或插头内。

4.根据权利要求2所述的新型传染病核酸快速检测试剂盒，其特征在于，所述微量核酸提取装置的管状主体与插头为一体或由管状主体与插头两个部件连接而成，其中，所述插头为锥状。

5.根据权利要求2所述的新型传染病核酸快速检测试剂盒，其特征在于，所述微量核酸提取装置的滤芯装置(4)包括一个与管状主体或插头内壁相适应的中空的套筒和设置在套筒内部的滤膜，套筒两端为设置有挡板(5)的网状结构。

6.根据权利要求4或5任一权利要求所述的新型传染病核酸快速检测试剂盒，其特征在于，所述微量核酸提取装置的滤芯装置的挡板(5)位于底面的中心，挡板面积大于插头下孔的面积。

7.根据权利要求2所述的新型传染病核酸快速检测试剂盒，其特征在于，所述的裂解液选自异硫氰酸胍、盐酸胍或肌酸胍，所述的清洗液为Tris缓冲液，洗脱液为Tris-HCl溶液。

8.根据权利要求1所述的新型传染病核酸快速检测试剂盒，其特征在于，所述的核酸恒温扩增反应试剂盒包括核酸恒温扩增反应液、阳性对照组和阴性对照组；其中，核酸恒温扩增反应液中含有一对外围引物、一对交叉引物、一对探针、dNTPs溶液、DNA聚合酶、MgSO₄、1×Thermol buffer和无菌双蒸水。

9.根据权利要求8所述的新型传染病核酸快速检测试剂盒，其特征在于，所述的核酸恒温扩增反应试剂盒中，

一对交叉引物分别为交叉引物F、交叉引物R，所述交叉引物F、交叉引物R主要由杂交序列、连接区域和互换序列三部分组成；其中杂交序列是与模板特异性杂交用于扩增延长的碱基序列；连接区域用于引物上两个不同序列的连接，通常为1～3个单核苷酸；互换序列，即交叉引物F的杂交序列用来作为交叉扩增引物R的5’末端序列，反之，交叉扩增引物R的杂交序列用来作为交叉引物F的5’末端序列；

一对外围引物分别为外围引物F、外围引物R，外围引物F为正向外围引物，与靶基因的反义链完全互补，外围引物R为反向外围引物，与靶基因的正义链完全互补。

10.根据权利要求8所述的新型传染病核酸快速检测试剂盒，其特征在于，所述的核酸恒温扩增反应试剂盒中，所述的DNA聚合酶选自Bst DNA聚合酶、Klenow DNA聚合酶、VentDNA聚合酶或Phi 29DNA聚合酶。

11.一种利用权利要求1～10任一权利要求所述的新型传染病核酸快速检测试剂盒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)利用无仪器微量核酸提取装置提取标本中的核酸物质：

裂解：将待测样本加入裂解液，混匀；

吸附：将微量核酸提取装置与一次性注射器连接，抽吸待测样本，待测样本中的核酸成分吸附在滤膜上，弃去滤液；

清洗：用微量核酸提取装置抽吸清洗液，清洗滤膜，弃去滤液；

洗脱：用微量核酸提取装置抽吸洗脱液，洗脱液流经滤膜将吸附在膜上的核酸成分洗脱，得到核酸水溶液；

(2)利用核酸恒温扩增反应试剂盒对步骤(1)得到的核酸物质进行扩增；将步骤(1)提取得到的DNA作为模板加入到装有恒温扩增反应液的PCR管中，在60～65℃下扩增反应60～65分钟，优选63℃下扩增反应60分钟；对照PCR管中分别加入标准阳性模板和标准阴性模板；

(3)利用核酸防污染检测装置对扩增得到的核酸物质进行检测。