[发明专利]一种蓝萼甲素的提取方法

说明书

技术领域

本发明属于中药提取领域，具体涉及一种以蓝萼香茶菜药材为原料制备高 纯度蓝萼甲素的方法。

背景技术

蓝萼甲素为蓝萼香茶菜的活性成分，蓝萼甲素具有显著的药理活性，蓝萼 甲素可抑制卡西霉素刺激的兔血小板生成血小板活化因子，能抑制花生四烯酸 诱导的兔血小板血栓素A2生成，并同时升高前列腺素E2，能显著抑制ADP， AA，PAF等诱导的兔血小板聚集，显著升高血小板内cAMP水平(参见：Zhang  B，Long K.Effects of glaucocalyxin A on aggtegation and cAMP levels of  rabbit platelets in vitro.Acta Pharmacologica Sinica 1993，14(4)：347.)蓝萼 甲素具有细胞毒作用，对艾氏腹水癌有一定抑制作用，体内对S180实体瘤抑 制率达30.4％(10mg/kg，7天)，蓝萼甲素对DNA、RNA和蛋白质合成具有 可逆性抑制作用，并呈剂量相关性(参见：张淑香等，蓝尊甲素在体外对DNA， RNA和蛋白质生物合成的影响药学情报通讯1990，8(3)：238.)。蓝萼甲素 对A549(人肺癌细胞)、LOVO(人肠癌细胞)、6T-CEM(人T细胞白血病细 胞)、HL-60(人白血病细胞)具有较强的细胞毒活性，可用于制备抗癌药物 (参见：陈海生等，蓝萼香茶菜中二萜类化合物在制备抗癌药物中的应用 CN101455652-3320283)。

现有技术中，从药材蓝萼香茶菜中提取蓝萼甲素的方法不仅步骤繁琐，得 率偏低，普遍低于10％，而且由于采用对生物体具有毒性的溶剂，残留的有毒 溶剂不符合药典要求，具体包括以下步骤：

(1)采集药材蓝萼香茶菜地上部分并粉碎，在常压下，用体积百分数 85％～95％乙醇水溶液回流提取2～3次，每次回流提取2小时，合并提取液， 减压回收溶剂，至每毫升溶剂含原药材3～10g；

(2)用等体积的石油醚萃取三次，石油醚层弃去，水层再用等体积氯仿萃取 三次，合并氯仿层并浓缩，得到氯仿萃取液；

(3)向步骤(2)所得氯仿萃取液中加入硅胶搅拌均匀，减压干燥，进行硅胶柱 层析；以氯仿∶甲醇200∶1或氯仿∶甲醇100∶1洗脱，以薄层层析对照，收集 含有蓝萼甲素的洗脱液，将洗脱液回收溶剂；

(4)以无水乙醇或甲醇反复结晶，得蓝萼甲素，测试纯度，计算得率。

采用上述技术方案所得蓝萼甲素的纯度一般在90％以上，但得率一般为 7％～9％，而且过程中使用了有毒的溶剂，氯仿、甲醇，并且残留的有毒溶剂 会影响蓝萼甲素作为药物的使用，不符合药典要求。

发明内容

本发明目的是提供一种蓝萼甲素的提取方法，在提高纯度和得率的同时， 避免使用有毒的溶剂，使提取的蓝萼甲素符合药典要求。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：一种蓝萼甲素的提取方法， 提取、硅胶柱层析洗脱色素和杂质、纯化步骤，具体包括以下步骤：

(1)采集原药材蓝萼香茶菜地上部分并粉碎，在常压下，用体积百分数 75～80％乙醇水溶液回流提取2～3次，每次回流提取2～3小时，合并提取液， 减压除去部分溶剂，得浓缩提取液；

(2)向步骤(1)所得浓缩提取液中加入硅胶并搅拌均匀，减压干燥，进行硅胶 柱层析：以硅胶柱体积为1体积份，首先以2～3份体积份的洗脱液A洗脱脂溶 性色素，再以4～6份体积份的洗脱液B洗脱杂质，最后以10～15份体积份的洗 脱液C洗脱；收集洗脱液，浓缩后放置，析出晶体；

其中，所述洗脱液A为石油醚和乙酸乙酯的混合物，并且按体积比，石油 醚∶乙酸乙酯＝8∶1；所述洗脱液B为石油醚和乙酸乙酯的混合物，并且按体 积比，石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1；所述洗脱液C为石油醚和乙酸乙酯的混合物， 并且按体积比，石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1；

(3)无水乙醇重结晶，得蓝萼甲素晶体。

上述技术方案中，步骤(1)中，减压除去的部分溶剂可以回收再循环使用； 除去部分溶剂的量取决于浓缩提取液的浓度，浓缩提取液的浓度为：浓缩提取 液的体积∶原药材的质量＝1ml∶3～4g；例如，原药材的质量为1200g，则浓缩 提取液的体积对应为300～400ml。

由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有下列优点：