[发明专利]一种检测羊驼副结核分支杆菌抗体的试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种检测羊驼副结核分支杆菌抗体的试剂盒，包含下列试剂：

(1)副结核分支杆菌重组hed蛋白；

(2)羊驼副结核阳性对照血清、阴性对照血清。

2.根据权利要求1所述的检测羊驼副结核分支杆菌抗体的试剂盒，其特征在于还包含酶标板、包被液、封闭液、PBST、辣根过氧化物酶标记的金黄色葡萄球菌蛋白A、显色液配制原料和终止液；

所述包被液是浓度为1mol/L的Tris-HCl缓冲液，pH 7.5；

所述封闭液是质量浓度为2％的明胶溶液；

所述PBST的组成是：Na₂HPO₄ 2.9g/L，KH₂PO₄ 0.2g/L，NaCl 8.0g/L，KCl 0.2g/L，Tween-20体积浓度为0.05％，其pH为7.4；

所述显色液配制原料包括：①由Na₂HPO₄·12H₂O 18.408g/L，柠檬酸5.106g/L组成的磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液，pH 5.0；②邻苯二胺；③体积浓度为30％的H₂O₂水溶液；

所述终止液是浓度为2mol/L的H₂SO₄溶液。

3.一种采用权利要求2的试剂盒检测羊驼副结核分支杆菌抗体的方法，按如下步骤：

(1)、包被：副结核分支杆菌重组hed蛋白用包被液稀释至3.75μg/mL，于酶标板各孔中分别加入100μL，4℃包被过夜，用PBST洗涤5次；

(2)、封闭：每孔加入300μL封闭液，4℃封闭过夜，用PBST洗涤5次；

(3)、加入待检样品：以PBST分别将阳性对照血清、阴性对照血清、待检血清按体积1∶50稀释，每孔中加入100μL，37℃孵育60min，用PBST洗涤5次；

(4)、加入辣根过氧化物酶标记的金黄色葡萄球菌蛋白A：用PBST将辣根过氧化物酶标记的金黄色葡萄球菌蛋白A作1∶5000稀释，每孔中加入100μL，37℃孵育60min，用PBST洗涤5次；

(5)、配制并加入显色液：临显色之前向所述磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液中加入邻苯二胺，使邻苯二胺浓度达到0.4g/L，然后加入所述的H₂O₂水溶液0.15mL，即获得显色液；每孔加入该显色液100μL，37℃避光孵育15min；

(6)、终止：每孔加入100μL终止液终止反应，酶标仪测定每孔的OD_490nm值；

(7)、判定：待检血清孔的OD_490nm值≥阴性对照血清孔的OD_490nm值+0.24，判为阳性；反之判为阴性。