[发明专利]功能性双歧杆菌高密度培养及其冻干产品的制备方法

权利要求书

1.功能性双歧杆菌高密度培养，其特征在于功能性双歧杆菌高密度培养按以下步骤进行：一、将经过耐氧驯化的功能性双歧杆菌接种到发酵罐的增菌培养基中，在温度为35～37℃、pH值为6.5～6.8的条件下培养15～17h，得发酵液；二、发酵液在0～20℃时，加入与发酵液等重量的质量浓度为10％的柠檬酸钠溶液或质量浓度为10％的磷酸钠溶液对发酵液进行蛋白的洗脱，再加入质量浓度为0.2～2％的壳聚糖进行菌体的絮凝；三、絮凝后的发酵液使用孔径为100～200nm、面积为0.5m²的陶瓷膜，在跨膜压力为110KPa进行膜浓缩处理至絮凝后的发酵液的浓缩倍数达到6，得到含有功能性双歧杆菌的膜浓缩产物，即完成功能性双歧杆菌高密度培养；其中步骤一中接种量为2％；步骤一中增菌培养基由80～120g的脱脂乳粉，40～60g的胰蛋白酶水解乳清粉，30～60g的番茄汁、30～60g的麦芽汁、10～30g乳糖、0.50～0.70g的酵母膏或酵母粉、6.8～7.2mg的腺嘌呤和50～54mg的L-半胱氨酸盐酸盐加入蒸馏水并定容至1000mL组成；步骤三中膜浓缩处理的方式为两个陶瓷膜管串联。

2.根据权利要求1所述的功能性双歧杆菌高密度培养，其特征在于步骤一中采用中和剂调节增菌培养基的pH值，中和剂为质量浓度为10～15％的氢氧化钠、质量浓度为10～15％的氨水或质量浓度为20％的Na₂CO₃；步骤一中培养15～17h的过程中需补加乳糖，乳糖补加量为所消耗的中和剂中碱性物质摩尔量的3～5倍，同时采用D301型树脂吸附培养过程中产生的钠盐。

3.根据权利要求1或2所述的功能性双歧杆菌高密度培养，其特征在于步骤一中在温度为36℃、pH值为6.6的条件下培养16h，得发酵液。

4.根据权利要求3所述的功能性双歧杆菌高密度培养，其特征在于步骤一中增菌培养基由90～110g的脱脂乳粉，45～55g的胰蛋白酶水解乳清粉，40～50g的番茄汁、40～50g的麦芽汁、15～25g乳糖、0.55～0.65g的酵母膏或酵母粉、6.9～7.1mg的腺嘌呤和51～53mg的L-半胱氨酸盐酸盐加入蒸馏水并定容至1000mL组成。

5.根据权利要求3所述的功能性双歧杆菌高密度培养，其特征在于步骤一中增菌培养基由100g的脱脂乳粉，50g的胰蛋白酶水解乳清粉，45g的番茄汁、45g的麦芽汁、20g乳糖、0.60g的酵母膏或酵母粉、7mg的腺嘌呤和52mg的L-半胱氨酸盐酸盐加入蒸馏水并定容至1000mL组成。

6.根据权利要求4或5所述的功能性双歧杆菌高密度培养，其特征在于步骤二中加入质量浓度为0.5～1.5％的壳聚糖进行菌体的絮凝。

7.根据权利要求4或5所述的功能性双歧杆菌高密度培养，其特征在于步骤二中加入质量浓度为2％的壳聚糖进行菌体的絮凝。

8.制备如权利要求1所述的功能性双歧杆菌高密度培养的所得功能性双歧杆菌冻干产品的方法，其特征在于功能性双歧杆菌冻干产品的制备方法按以下步骤进行：一、按重量比1∶1～2将含有功能性双歧杆菌的膜浓缩产物与冷冻保护剂混合，在温度0～10℃的条件下进行10～12h的冷冻前预冷处理，得混合物；二、将混合物置于-70℃冷冻机的冷冻盘中进行预冻，直至混合物的温度达到-45℃，保持30min，然后以5℃/30min的速率升温至-28℃，并维持此温度至真空度达到0.05MPa完成主干燥阶段，再升温至10℃并维持此温度至真空度达到0.03MPa完成解析干燥阶段，取出后用颗粒机粉碎，再用无菌铝箔纸盒包装并置于-20℃的环境中贮藏，即完成功能性双歧杆菌冻干产品的制备；其中步骤一中冷冻保护剂10～20g的脱脂乳粉、1～3g的甘油、1～2g的维生素C、0.5～1g的谷氨酸或甘氨酸、5g的蔗糖和3～15g的海藻糖加入蒸馏水并定容至1000mL组成；步骤二中混合物置于-70℃冷冻机的冷冻盘中的大小为长40cm×宽50cm×高20mm。

9.根据权利要求8所述的功能性双歧杆菌冻干产品的制备方法，其特征在于步骤一中按重量比1∶1.5将含有功能性双歧杆菌的膜浓缩产物与冷冻保护剂混合，在温度5℃的条件下进行11h的冷冻前预冷处理，得混合物。

10.根据权利要求8或9所述的功能性双歧杆菌冻干产品的制备方法，其特征在于步骤一中冷冻保护剂15g的脱脂乳粉、2g的甘油、1.5g的维生素C、0.8g的谷氨酸或甘氨酸、5g的蔗糖和8g的海藻糖加入蒸馏水并定容至1000mL组成。