[发明专利]添加渗透压保护剂提高丁二酸浓度和生产强度的方法

权利要求书

1.一种添加渗透压保护剂提高丁二酸浓度和生产强度的方法，其特征在于，步骤如下：

菌种活化：菌种在斜面培养基中进行平板划线后，在37 ℃厌氧培养箱中活化培养24 h；种子培养：活化培养后的菌种转接到种子培养基中，37 ℃培养10~12 h后作为种子液；

发酵罐培养：将活化好的种子液和灭好的葡萄糖接入发酵罐中，接种量为体积比3~10 %，其特征在于，在所述发酵罐培养的培养基中，添加有渗透压保护剂，所述的渗透压保护剂的加入量为：1 g/L~6 g/L。

2. 根据权利要求1所述的添加渗透压保护剂提高丁二酸浓度和生产强度的方法，其特征在于，所述的厌氧发酵生产丁二酸的微生物选自：产琥珀酸放线杆菌Actinobacillus succinogenes NJ113、产琥珀酸放线杆菌Actinobacillus succinogenes 130Z 、重组大肠杆菌 Escherichia coli，或产琥珀酸厌氧螺菌 Anaerobiospirilum succiniciproducens。

3.根据权利要求1所述的添加渗透压保护剂提高丁二酸浓度和生产强度的方法，其特征在于，所述的渗透压保护剂选自：甜菜碱、海藻糖、甘氨酸、脯氨酸中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的添加渗透压保护剂提高丁二酸浓度和生产强度的方法，其特征在于，所述的菌种活化步骤中，菌株活化的斜面培养基为pH6.0~8.0的能提供碳源、氮源及无机盐的固体斜面培养基，培养时将菌体在斜面培养基中平板划线后，在厌氧培养箱中培养，培养箱含N₂、CO₂和H₂的混合气体，温度为30~40 ^??C，活化培养24~48 h，用于种子培养基接种和菌株保存。

5.根据权利要求1所述的添加渗透压保护剂提高丁二酸浓度和生产强度的方法，其特征在于，所述的种子培养步骤中，种子培养的培养基为pH6.0~8.0的能够提供碳源、氮源及无机盐的液体培养基，培养时在100mL的血清瓶中加入20~80 mL的种子培养基，通入CO₂气体1 min，在115~121 ^??C灭菌15~30 min，冷却后接入斜面培养菌株，在温度为30~40 ^??C，摇床转速为100~300 rpm的条件下培养10~16 h，用于发酵培养基接种。

6.根据权利要求1所述的添加渗透压保护剂提高丁二酸浓度和生产强度的方法，其特征在于，所述的发酵步骤中，发酵培养的培养基为pH6.0~8.0的能够提供碳源、氮源及无机盐的液体培养基，并加入渗透压保护剂，3 L发酵罐中装1.5 L发酵培养基，接种量为体积比7%，温度为35~40 ^??C，始终通入CO₂气体来保持厌氧环境，整个发酵过程中pH控制在6.5~7.0，搅拌速度为100~300 rpm，发酵30~48 h。

7.根据权利要求6所述的添加渗透压保护剂提高丁二酸浓度和生产强度的方法，其特征在于，所述发酵罐培养的条件是：搅拌转速为200 rpm，37℃发酵培养，CO₂通气量为0.25 vvm。

8.根据权利要求1~7之一所述的添加渗透压保护剂提高丁二酸浓度和生产强度的方法，其特征在于，所述的渗透压保护剂的加入量为：1~5 g/L。

9.根据权利要求8所述的添加渗透压保护剂提高丁二酸浓度和生产强度的方法，其特征在于，所述的渗透压保护剂的加入量为：2.9 g/L。