[发明专利]一种哺乳动物细胞的灌流培养方法

权利要求书

1.一种哺乳动物细胞培养的灌流操作方法，包括如下步骤：

(1)将目标细胞株在初始培养基中进行逐级放大培养阶段，和

(2)在发酵罐中进行细胞培养阶段，其特征在于细胞培养阶段培养初期至细胞对数生长期的温度为36-37℃、pH为7.1-7.2、搅拌转速为150rpm；当细胞密度达到8×10⁶cells/mL时，调整温度为31-33℃、调整pH为6.9-7.0、调整搅拌转速为80-100rpm。

2.如权利要求1所述的灌流操作方法，其特征在于：当细胞密度达到8×10⁶cells/mL时，所述的温度调整为33℃，所述的pH调整为6.9，所述的搅拌转速调整为82rpm。

3.如权利要求1所述的灌流操作方法，其特征在于所述的目标细胞株选自CHO细胞、NSO细胞、VERO细胞或BHK细胞等常用哺乳动物宿主细胞。

4.如权利要求1所述的灌流操作方法，其特征在于所述的初始培养基为无血清培养基。

5.如权利要求1所述的灌流操作方法，其特征在于所述的逐级放大培养阶段中每72h传代转瓶培养，经过30ml、90ml、300ml、900ml、1500ml转瓶的细胞扩增后，当细胞总数达到1×10⁸个时，转移到5.0L发酵罐中。

6.如权利要求5所述的灌流操作方法，其特征在于所述的转瓶培养时摇床转速75转/分钟。

7.如权利要求1所述的灌流操作方法，其特征在于细胞培养阶段全过程控制葡萄糖浓度0.5-3g/L。

8.如权利要求1所述的灌流操作方法，其特征在于细胞培养阶段全过程控制溶氧50％。