[发明专利]蛭弧菌蛭质体菌液在消除蔬菜致病菌中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及细菌的应用，提供了蛭弧菌蛭质体菌液在消除蔬菜致病菌中的新应用。 

背景技术

近年来，各种各样的蔬菜制品占领了各大超市。即食蔬菜就是其中一种，这种蔬菜制品进行深加工后真空包装上架，不仅可以延长贮藏期，有利于保存运输，调剂蔬菜的淡旺季，做到全年均衡供应，而且还可以改进蔬菜风味，增加花色品种，满足人们对蔬菜副食品日益增长的需要。 

即食蔬菜是由各种新鲜蔬菜加工而成，新鲜蔬菜由于水分含量很大，非常容易引起微生物的繁殖，导致蔬菜的腐败变质。大肠杆菌、沙门氏菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌是其主要易染致病菌，占所有蔬菜致病菌的80％以上。还有日常生活中人们食用的一些生食蔬菜如葱、番茄、黄瓜、生菜等，往往都是清洗之后直接食用，这样很容易造成细菌性食物中毒。 

蔬菜在清洗过程的除菌方法，目前常用的主要是化学除菌、热杀菌和一些物理方法。化学方法主要是应用一些化学杀菌剂，如液氯、次氯酸钠、二氧化氯、臭氧等，这些化学杀菌剂不仅容易造成残留而对人体造成危害，加工生产中产生的废水、废渣排放到环境中还容易造成环境污染。物理杀菌方法的高成本、热杀菌对蔬菜色香味的影响等都制约着即食蔬菜的发展。 

蛭弧菌是寄生于其他细菌，并能导致宿主细菌裂解的一类细菌。比一般细菌小，能通过细菌滤器，有类似噬菌体的作用。单细胞，呈 弧形或逗点状，有时呈螺旋状，大小0.2～0.6×0.8～1.2微米，端生鞭毛，多为一根。革兰氏染色呈阴性，可以裂解致病菌或潜在致病性细菌。我们的最新研究表明，有的蛭弧菌菌株可以裂解包括大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等一些常见食源性致病菌。蛭弧菌的生活史分两个阶段：自由生活，能运动，不进行增殖的游泳体阶段和在特定宿主细菌的周质空间内进行生长繁殖的蛭质体阶段。蛭弧菌进入宿主菌细胞周质空间后，宿主细菌在30分钟内即停止呼吸作用，死亡；而蛭弧菌则分泌多种酶，通过降解宿主细胞的大分子成为单体，然后摄入用于其生物大分子的合成。随着细胞增殖和水解酶产生，使宿主细胞壁膜被破坏，从而裂解释放出蛭弧菌。与游泳体相比，蛭质体具有制备、保存更为方便，环境耐受力强，杀菌作用时间虽略慢但更久等特点。 

已有的研究表明，作为一种有益微生物制剂，无论是在食品工业还是在(海洋)水产养殖等领域，蛭弧菌的应用均是安全的。例如：在国外，Lenz and Hespell(1978)研究发现，蛭弧菌及对动物及人的细胞不具侵染性[Lenz R.W.，Hespell R.B.Attempts to growbedellovibrios  micurgically-injected into animal cells.Archives ofMicrobiology，1978，119(3)：245-248]。在国内，林茂等(2006)研究了蛭弧菌对鱼类细胞的作用，发现它对鱼类细菌没有侵染作用[林茂，杨先乐，薛晖，曹海鹏，邱军强。蛭弧菌BDH21 02对鱼类细胞及病原菌的作用。微生物学通报，2006，33(1)：7-11]。 

因此，应用蛭弧菌蛭质体作为清洗剂用于蔬菜在食用前、加工的清洗过程中，既不会导致细菌出现抗性，也无噬菌体疗法中宿主过于专一的缺点，有效的控制和消除生食蔬菜、即食蔬菜食用前、加工过程中的菌落总数及致病菌。在保证食品安全、营养的同时也有效降低了耗能。因此蛭弧菌蛭质体作为一种新的杀菌方法具有相 当大的优势。 

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的弊端，提供蛭弧菌蛭质体菌液在消除蔬菜清洗过程、加工设备及加工环境中致病菌的新应用。 

本发明的目的通过以下技术方案实现： 

蛭弧菌蛭质体菌液在消除蔬菜致病菌中的应用。 

所述蛭弧菌蛭弧菌为(Bdellovibrio sp.)BDFM05，于2009年8月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M 209172。 

所述蛭弧菌蛭质体菌液在消除蔬菜致病菌中的应用是将蔬菜在蛭弧菌蛭质体菌液中浸泡15-45min或者在蔬菜的加工环境中喷洒蛭弧菌蛭质体菌液，喷洒用量为10～100mL/m²。 

所述蛭弧菌蛭质体菌液浓度至少为10²pfu/mL，优选10²～10⁶pfu/mL。 

所述蛭弧菌蛭质体菌液的制备方法为：