[发明专利]蛭弧菌混合体菌液在消除蔬菜致病菌中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及细菌的应用，特别涉及蛭弧菌蛭质体和游泳体混合菌液在消除蔬菜致病菌中的新应用。 

背景技术

近年来，全球食品安全恶性事件频发，食源性疾病已成为影响公共健康的重要问题，往往是致人非正常死亡的主要原因。我国每年向卫生部上报的数千件食物中毒中，大部分都是致病微生物引起的。蔬菜常污染肠出血性大肠杆菌、沙门氏菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌等，而我国食品污染物监测网数据显示，蔬菜中沙门氏菌、肠出血性大肠杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌3种常见食源性致病菌检测阳性率逐年上升，是三种主要控制致病菌。 

蔬菜富含各种维生素和膳食纤维，是人们日常生活必不可少的食品。近几年，市面上出现一种即食蔬菜，这种蔬菜产品不仅满足了现代人快节奏工作需求，而且更迎合了市民讲究保健和方便休闲的心理。这种即食蔬菜原料可以采用除叶菜类的各种蔬菜，包括冬笋、藕、土豆、香芹、胡萝卜等等。其加工生产流程主要是：新鲜蔬菜-清洗-加工-真空包装。 

生产过程中现有的清洗除菌方法主要通过酸液、碱液、加热除菌，即化学除菌和热杀菌。化学除菌极易导致化学残留而对人体产生极大危害，而热杀菌不仅破坏了蔬菜中的维生素等营养物质，一些致病菌芽孢的强耐热性还易造成杀菌不彻底，最终导致食物中毒的发生。而一些生食蔬菜像生菜、葱、番茄、黄瓜等由于人们经过简单清洗后就直接食用，所以同样容易造成细菌性食物中毒。除此之外， 由于一些化学杀菌剂的使用，像二氧化氯、次氯酸、漂白粉、过氧化物等，使得排放的废水、废渣中含有大量的氯，对环境造成极大危害。 

噬菌蛭弧菌是一类专门以捕食细菌为生的寄生性细菌。其菌体大小比通常细菌还小，为0.2～0.6×0.8～1.2微米，有类似细菌噬菌体的作用，但不是病毒，而是真正的细菌，即具有一般细菌所有的各种特性。寄生和裂解细菌是蛭弧菌独特的特性。也是它维持自己生命活动最突出的功能。我们的最新研究表明，有的蛭弧菌菌株可以裂解包括大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等一些常见食源性致病菌。 

蛭弧菌生活史分两个阶段：自由生活，能运动，不进行增殖的游泳体阶段和在特定宿主细菌的周质空间内进行生长繁殖的蛭质体阶段。蛭弧菌在游泳体阶段，识别并与宿主发生不可逆结合，然后侵入宿主。蛭弧菌进入宿主菌细胞周质空间后，宿主细菌在30分钟内即停止呼吸作用，死亡；而蛭弧菌则分泌多种酶，通过降解宿主细胞的大分子成为单体，然后摄入用于其生物大分子的合成。随着细胞增殖和水解酶产生，使宿主细胞壁膜被破坏，从而裂解释放出蛭弧菌。而游泳体和蛭质体的混合菌液可兼具游泳体起效快，活力强和蛭质体制备、保存容易，杀菌作用时间更久和环境耐受力更强的优点。 

已有的研究表明，作为一种有益微生物制剂，无论是在食品工业还是在(海洋)水产养殖等领域，蛭弧菌的应用均是安全的。例如：在国外，Lenz and Hespell(1978)研究发现，蛭弧菌及对动物及人的细胞不具侵染性[Lenz R.W.，Hespell R.B.Attempts to growbedellovibrios micurgically-injected into animal cells.Archives ofMicrobiology，1978，119(3)：245-248]。在国内，林茂等(2006)研究 了蛭弧菌对鱼类细胞的作用，发现它对鱼类细菌没有侵染作用[林茂，杨先乐，薛晖，曹海鹏，邱军强。蛭弧菌BDH2102对鱼类细胞及病原菌的作用。微生物学通报，2006，33(1)：7-11]。 

因此，运用蛭弧菌混合菌液作为清洗除菌剂用于消除蔬菜携带菌落总数及致病菌的这种生物方法就显得既安全又方便。蛭弧菌作为一类具有裂解致病菌的特殊细菌，不仅可应用即食蔬菜食用、加工前的杀菌处理，同时又避免了即食蔬菜烹调过程中由于菌量基数过大、加热杀菌不彻底造成的危害。而且不会导致细菌出现抗性，也无噬菌体疗法中宿主过于专一的缺点，在杀灭致病菌后就会因为饥饿而死亡，绝不会残留，在保证食品安全的同时也有效降低了耗能，起到保护环境的作用。因此蛭弧菌这种绿色除菌方法具有相当大的优势。 

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的弊端，提供蛭弧菌蛭质体和游泳体混合菌液在消除蔬菜清洗过程、加工设备及加工环境中致病菌的新应用，其特征按照绿色无公害蔬菜微生物标准，减少设备投资成本，提高即食蔬菜加工前的安全性，降低食源性致病菌食物中毒的发生率。 

本发明的目的通过下述方案实现： 

蛭弧菌混合体菌液在消除蔬菜致病菌中的应用。