[发明专利]莱克多巴胺残留的时间分辨免疫分析检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种检测莱克多巴胺残留的时间分辨免疫分析检测试剂盒，其特征在于包括包被了莱克多巴胺抗原的酶标板、莱克多巴胺抗体、镧系元素标记羊抗兔或羊抗鼠抗体；所述镧系元素为Eu³⁺、Tb³⁺、Dy³⁺或Sm³⁺。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述莱克多巴胺抗原是将莱克多巴胺和载体蛋白偶联得到；所述莱克多巴胺抗体包括单克隆抗体、兔多克隆抗体或基因工程抗体。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于还包括莱克多巴胺标准溶液、增强液、浓缩洗涤液和样品稀释浓缩液。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述莱克多巴胺标准溶液是以浓度为1000μg/L的莱克多巴胺标准品配成的浓度梯度为8μg/L、4μg/L、2μg/L、1μg/L、0.5μg/L、0μg/L的莱克多巴胺标准品工作液。

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述增强液包括β-二酮体、三辛基氧化磷、Triton X-100、冰醋酸和pH值为2.0～3.2的邻苯二甲酸氢钾。

6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述浓缩洗液包括0.5～1.5％的吐温20的磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液pH值为7.4，浓度为0.1mol/L；所述浓缩稀释液为pH值7.4～8.0、0.1～0.25mol/L的Tris-HCl。

7.根据权利要求1所述的时间分辨免疫分析试剂盒，其特征在于所述酶标板是96孔酶标板，包被有浓度为75μg/L抗莱克多巴胺抗原，并封闭微孔表面未吸附位点；所述封闭液包括溶于PBS的脱脂奶粉溶液。

8.一种莱克多巴胺的检测方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)样品前处理；

(2)用权利要求1～7任一项所述的试剂盒进行检测；

(3)结果处理与分析。

9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于所述样品前处理为：

(1)尿液样本处理：

清澈尿液样品可以直接进行检测分析；若尿样呈浑浊状，2000r/min离心5min或过滤，用上清液检测；

或(2)饲料样本处理：

将饲料粉碎，称取2g置于50mL试管中，加入12mL10％氨化甲醇，充分混匀振荡1～2min，加入9mL乙酸乙酯，振荡20min，5000r/min离心10min，取有机相500μL于另一试管中，用氮气吹干，加入样品稀释液500μL稀释后直接检测；

或(3)组织样本处理：

所述组织包括肌肉、肝脏或肾脏；将组织破碎和均质化，称取2g均质化后的组织样本置于可密封的试管中，加10mL纯甲醇，涡旋混匀5min，10000r/min离心5min或3000r/min离心20min，取上清，沉淀中再加入10mL纯甲醇，涡旋混匀后离心，取上清，混匀两次离心上清，取出10mL用氮气吹干，取1mL样品稀释液重新充分溶解后用于检测。

10.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将试剂盒从冷藏环境中取出，置于20～24℃环境中平衡不少于30min，将酶标板条固定，做平行实验，按顺序编号；

(2)在标准品孔加入50μL标准溶液，样品孔加入50μL待测样品，然后每孔加入50μL莱克多巴胺单克隆抗体工作液，混匀；振荡反应；

(3)步骤(2)所述振荡反应后洗板，拍干，每孔加入100μL铕标二抗工作液，振荡反应；

(4)步骤(3)所述振荡反应后洗板，拍干，每孔加入200μL增强液，混匀，避光室温轻拍振荡；

(5)用TRFIA检测仪测定各孔荧光值；

(6)根据标准溶液荧光值与浓度半对数做标准曲线，根据标准曲线与样品溶液荧光值计算样品浓度。