[发明专利]新生儿持续性肺动脉高压动物模型的建立方法

说明书

技术领域

本发明属生物领域，涉及一种新生儿持续性肺动脉高压动物模型的建立方法。

背景技术

新生儿持续性肺动脉高压(persistent pulmonary hypertension of the newborn，PPHN)是指生后肺血管阻力持续性增高，肺动脉压超过体循环动脉压使由胎儿型循环过渡至正常“成人”型循环发生障碍，导致卵圆孔及(或)动脉导管水平血液的右向左分流，临床表现为严重的低氧血症，多见于足月儿及过期产儿。PPHN是新生儿重症监护室的一个重要的临床问题，它在新生儿中的发病率可高达7/1000。机械通气、吸入一氧化氮(nitric oxide，NO)以及体外膜肺氧合等治疗措施虽然改善了PPHN的预后，但死亡率仍然较高。

PPHN的病理学特征表现为右心室肥厚、肺动脉中层肥厚、肺小动脉远端肌化、肺毛细血管密度减少。迄今为止，PPHN发病机制已经从肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞水平进行了研究，但确切的机制尚未完全阐明。传统的PPHN动物模型可以由低氧、动脉导管关闭、药物(消炎痛)、胎粪吸入以及内毒素血症等诱导。目前PPHN研究的动物模型大多数基于外科手术结扎胎羊动脉导管而诱导的。羊PPHN模型可以实时监测肺动脉压力以及可以进行气管插管以模拟PPHN生后的病理演变过程，但同时也存在一定的缺点，譬如动脉导管结扎手术难度较大、动物妊娠周期较长、动物购买费用昂贵等。

尽管低氧和消炎痛单独处理新生鼠可以诱导类似于PPHN的肺血管结构变化。然而，Geggel等研究认为单单慢性胎鼠缺氧尚不足以引起与PPHN相似的肺动脉结构改变，而且直接测定新生鼠肺动脉压力相当困难。

近来，脑型利尿肽(brain-type natriuretic peptide，BNP)已逐渐成为一种能够反映右心室压力负荷的标记物。BNP主要是在容量负荷、压力负荷以及心室应激的情况下由心室所分泌，而且BNP不能通过胎盘，新生儿BNP水平一般不受母亲条件的影响。因此，BNP水平可以作为诊断新生儿肺动脉高压的潜在的生物标记物。Reynolds等报道血浆BNP初始浓度大于550pg/ml可以预测PPHN，其敏感性为83％、特异度为100％；而且所有的PPHN患儿血浆BNP浓度均大于835pg/ml。

由低氧或消炎痛单个处理因素所诱导的模型已经被研究，然而由低氧联合消炎痛共诱导的动物模型还没有报道。我们假设，与单个处理因素相比，低氧联合消炎痛处理能够引起新生大鼠更加显著的肺血管重构。我们也假定新生大鼠血浆BNP水平将能够反映增加的肺动脉压力，可以间接地反映PPHN模型的建立。

发明内容

本发明的目的是提供一种新生儿持续性肺动脉高压动物模型的建立方法，所述方法包括在低氧条件下培养怀孕动物，并采用消炎痛对所述怀孕动物进行处理，通过以下步骤实现建模：

将体重在250-300g雌性SD大鼠交配过夜(计作d0天)，第二天标记为妊娠第一天(d1)，该模型中大鼠妊娠期是21天，在妊娠的第19天，孕鼠被随机分为四组开始低氧处理，即低氧组、消炎痛组、低氧和消炎痛联合处理组以及对照组，所有的处理持续3天，通过腹腔内输入消炎痛对培养的怀孕动物进行处理；腹腔内输入消炎痛，0.5mg/kg，一日两次，连续3天；消炎痛首先溶解在95％的酒精中并用孔径0.2um的过滤器除菌后4℃保存，在输入前用注射用水稀释至38％酒精浓度，输入量0.5mg/kg，一日两次，连续3天。低氧条件下培养怀孕动物3天，低氧条件为小于20％的氧浓度，优选12％的氧浓度。

本发明的有益之处是：由于应用低氧检测系统和腹腔内输入消炎痛，本发明的PPHN大鼠模型的构建更加精确与稳定，模型的可复制性也较强；并且应用BNP间接测定新生大鼠的肺动脉压力，使该模型的构建更加可靠，十分适于实验室研究应用。相对于大型动物PPHN模型的构建过程，此大鼠PPHN模型易于建立，时间周期较短，价廉，方便以及稳定可靠。本模型采用了测定血BNP的方法来无创评价肺动脉高压，在动物模型中尚没有报道过。

附图说明

图1为低氧装置。

图2为心脏组织HE染色。

图3为肺小动脉免疫组化图。

图4为肺组织成纤维细胞α-SMA表达。

图5为肺组织VG染色图片。

图6为肺动脉内皮细胞eNOS表达。

图7为肺动脉内皮细胞电镜图谱。

图8为Western blot图片。

具体实施方式

本发明结合实施例和附图作进一步的说明。

实施例1

1、动物模型的建立