[发明专利]高通量水稻转基因方法

权利要求书

1.一种用于基因转化的培养基，其特征在于：所述培养基的溶剂是水，溶质包括5-10g/L的蔗糖、100-300μL/L Silwet L-77、1-5μg/L的赤霉素和0.1-0.5mg/L的细胞分裂素。

2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述培养基是在MS基本培养液的基础上添加Silvet L-77、赤霉素、细胞分裂素得到的培养基；其中Silvet L-77、赤霉素和细胞分裂素在培养基的终浓度分别为100-300μL/L、1-5μg/L和0.1-0.5mg/L；所述MS基本培养液的溶剂是水，溶质如表1所示。

3.如权利要求1或2所述的培养基，其特征在于：所述Silwet L-77的浓度是200μL/L；所述赤霉素的浓度是3μg/L；所述细胞分裂素的浓度是0.1mg/L。

4.如权利要求1-3中任一所述的培养基，其特征在于：所述赤霉素是GA3；所述细胞分裂素是激动素KT。

5.一种水稻转基因方法，包括如下步骤：将含有待转基因的农杆菌转化液浸渍或淋冲水稻花序，成熟后收获种子；

所述含有待转基因的农杆菌转化液是将含有待转基因的农杆菌悬浮于权利要求1-4中任一所述的培养基中得到的转化液；所述含有待转基因的农杆菌转化液的OD₆₀₀为1.0-1.2。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述含有待转基因的农杆菌是将含待转基因的重组载体导入农杆菌中得到的；所述含待转基因的重组载体是将目的基因插入pCAMBIA1381或pJim19质粒的多克隆位点间得到的重组表达载体。

7.如权利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述水稻花序为在初花期经人工授粉后的花序；所述浸渍或淋冲是在自所述人工授粉时起的3小时内进行的。

8.如权利要求5-7中任一所述的方法，其特征在于：所述浸渍或淋冲的时间为20-40秒，优选是30秒。

9.如权利要求5-8中任一所述的方法，其特征在于：所述方法还包括在所述收获种子步骤之后进行种子萌发，得到转基因水稻；所述方法优选还包括在所述种子萌发后的筛选，所述筛选包括如下步骤：在所述收获种子后，将种子在含有潮霉素的抗性培养基上进行抗性筛选；所述潮霉素在所述抗性培养基中的浓度为40-60mg/L，优选是50mg/L；所述抗性筛选时间为20-30天。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于：所述筛选还包括所述抗性筛选后的分子生物学检测，优选是PCR检测、Southern blot检测和/或Western blot检测；所述PCR检测的引物是检测潮霉素抗性标记基因的引物和/或检测目的基因的引物。