[发明专利]检测复方杜仲片中松脂醇二葡萄糖苷含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于医药领域中成药有效成分含量的测定方法，具体涉及复方杜仲片中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定方法。

背景技术

复方杜仲片由杜仲、益母草、钩藤、夏枯草、黄芩制成，主要用于肾虚肝旺之高血压症。该产品具有良好的降高血压的作用，在临床应用较广。该产品收载于中国卫生部药品标准中药成方制剂第6册第117页WS3-B-1185-92。而标准中仅有简单的显微鉴别和显色反应对产品质量进行控制。这类鉴别方法粗糙，无专属性。无法有效控制产品质量。

复方杜仲片处方中的君药为杜仲，是我国的名贵药材，属于国家二级保护植物，具有补肝肾、强筋骨、降血压的作用，而杜仲中主要降血压的成分即为松脂醇二葡萄糖苷(Pinoresind Diglucoside，简称PDG)，因此对松脂醇二葡萄糖苷进行含量测定，更能体现复方杜仲片质量的优劣。

关于杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量测定方法文献报道较少，王月茹等在文献“HPLC测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量”，《现代中医药》，2009年11月第29卷第6期78～79页中报道了测定杜仲药材中松脂醇二葡萄糖苷含量的方法。但是，复方杜仲片的制备工艺是由多种药材采用水提取工艺制得，因此片剂中含有的成分复杂，还含有蛋白质、多糖类等等成分，如直接用水、甲醇等极性溶剂提取，过滤困难，从而影响了该成分的提取分离和测定数据的正确性。按该文献的方法松脂醇二葡萄糖苷是无法从复方杜仲片中分离出来，在高效液相色谱图中也检测不到相应的成分。为此，必需寻找能测定复方杜仲片中松脂醇二葡萄糖苷含量的具体可操作和生产上可应用的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测复方杜仲片中松脂醇二葡萄糖苷含量的方法。

本发明所采用的技术方案是这样实现的：用高效液相色谱法测定，每片含松脂醇二葡萄糖苷不得少于0.05mg，每片基片重量为0.35g，松脂醇二葡萄糖苷的分子式为C₃₂H₄₂O₁₆，具体操作按以下进行：

色谱条件  以十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以水为流动相B组成的洗脱液进行梯度洗脱；检测波长：230nm；流速：1ml/min；理论板数按松脂醇二葡萄糖苷峰计算应不低于2000；所说的梯度洗脱优选如下程序进行：

对照品溶液的制备  精密称取松脂醇二葡萄糖苷加入体积百分浓度为25％的甲醇水溶液制成每1ml中含松脂醇二葡萄糖苷0.035mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备  取复方杜仲片，除去包衣，研细，精密称定细粉1g，置三角瓶中，加入体积百分浓度为60％的甲醇水溶液80ml，超声提取30分钟，滤过，并用甲醇洗涤残渣，滤液加60ml正己烷萃取1次，取下层溶液减压浓缩至约5ml，再加无水乙醇30ml超声2分钟，滤取溶液，滤液减压浓缩至约0.5ml，用75％乙醇溶液7ml使溶解，通过100～200目的硅胶柱，用二氯甲烷40ml洗脱，弃去洗脱液，再用乙酸乙酯∶甲醇体积比为70∶30的混合溶液120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加体积百分浓度为30％的甲醇水溶液使溶解并定容至10ml，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液20ul，注入高效液相色谱仪，测定，按外标法计算即得。

松脂醇二葡萄糖苷为水溶性成分，可以采用水、甲醇、乙醇等溶剂提取。但由于复方杜仲片的制备工艺是由多种药材采用水提取工艺制得，因此片剂中含有的成分复杂，还含有蛋白质、多糖类等等成分，如直接用水、甲醇等极性溶剂提取，过滤困难，从而影响了该成分的提取分离和测定数据的正确性。为此，对供试品溶液的制备是关键技术。

供试品溶液的制备归纳采用如下方法予以比较：

采用同一批号复方杜仲片制备供试品溶液，并采用同一条件进行高效液相色谱检测：以碳十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂；以甲醇∶水的体积比为20∶80组成；检测波长：230nm；流速：1ml/min。

具体如下表所示：

从上表可知，只有采用甲醇提取才可能检测出松脂醇二葡萄糖苷，而提取后采用什么分离方法才能保证松脂醇二葡萄糖苷的谱峰分离效果好、纯度高、测定的准确度高也是该技术的关键，发明人通过反复试验确定了供试品的制备方法。

本发明的色谱条件的确定