[发明专利]一种乳中皮革水解物金标快速检测卡及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及食品安全检测，具体属于一种乳中皮革水解物金标快速检测卡及其制备方法。

背景技术

乳及乳制品是大众化的食品，不法经营者为牟取暴利向乳中掺假的现象时有发生，严重危害消费者的合法权益，已成为困扰我国乳制品行业健康发展，制约乳制品质量提升的重要因素。常见乳掺假手段有：兑水增加重量，添加食盐、硝酸盐和亚硝酸盐增加比重，掺抗生素、碱性物质和甲醛延缓腐败，添加脂肪粉提高脂肪含量；为提高乳蛋白含量添加尿素、三聚氰胺等含氮类物质。为此各级政府加大整治力度，不法商贩为逃避打击开始添加一种新型掺假物——皮革水解物。

皮革水解物是从皮毛中水解出的物质，主要成分是皮革水解蛋白。它是将皮革企业的下脚料、皮毛等经过浸泡还原、清洗、添加复合酶和活性炭后熬煮制成。制革废料中含有重铬酸钾和重铬酸钠，用它们生产皮革水解蛋白，重铬酸钾和重铬酸钠就会被带入产品中。重铬酸钾和重铬酸钠是强致癌物，有刺激性和腐蚀性，食用后可刺激和腐蚀消化道，对肝肾也有毒性。更为严重的是它们在体内无法分解，可缓慢积累，导致慢性中毒，使关节疏松肿大，甚至引发婴幼儿死亡。

皮革水解物与其他的掺假物不同之处在于，皮革水解物的主要成分皮革水解蛋白是一种真正的蛋白质，具有蛋白质的一般理化特性，因此很难把它与乳中正常的蛋白质区分。目前乳中皮革水解物的检测方法大致有三种：检测皮革水解物中皮革水解蛋白的L(-)-羟脯氨酸法、硝酸汞-苦味酸法和检测皮革水解物中重铬酸根的离子色谱法。分别介绍如下：

1、L(-)-羟脯氨酸法

L(-)-羟脯氨酸法是《食品中可能违法添加的非食用物质名单》(第二批)中提供的标准检测方法。其原理是皮革水解蛋白羟脯氨酸的含量较高，达10％以上，而正常牛奶蛋白中不含有此成分。通过测定牛奶中L(-)-羟脯氨酸含量，可推算出皮革水解蛋白含量，从而确定有无添加皮革水解物。试样经盐酸水解，释放出羟脯氨酸，经氯胺T氧化，生成含有吡咯环的氧化物。用高氯酸破坏过量的氯胺T。羟脯氨酸氧化物与对二甲氨基苯甲醛反应生成红色化合物，在波长558nm处进行比色测定。该方法优点是：检测限低、判定准确、不易受干扰。缺点是：1、反应时间长，仅样品的酸解就需要16-24小时。2、试剂腐蚀性高，大量使用盐酸、氢氧化钠和苯酚等腐蚀性物质，要求工作人员有专门的实验技能。3、仪器要求高，需要分光光度计、恒温水浴和加热器等专门仪器。

2、硝酸汞-苦味酸法

苦味酸法是鲜奶收购中常用的检测方法。其原理是：硝酸汞可沉淀乳酪蛋白，而皮革水解蛋白不会被去除，后者可与饱和苦味酸发生沉淀反应。向待测样品中添加硝酸汞溶液，用滤纸将乳酪蛋白沉淀过滤后，再缓缓加入饱和苦味酸。若是正常乳，过滤后滤液清亮，加苦味酸试剂后接触面无变化；而掺皮革水解蛋白的乳，过滤后滤液呈半透明，略带乳青色，加苦味酸试剂后接触面呈白色环状。该方法优点是：试剂易得，成本低廉。但也有明显缺点：所用酪蛋白沉淀剂硝酸汞为重金属盐，毒性大；且该法结果不易准确判读，易受牛奶酸度和外来物的干扰，出现假阳性。

3、离子色谱法

离子色谱法的原理是皮革水解物中含有微量的重铬酸根，通过测定牛奶中是否含有重铬酸根，就可以判断牛奶中是否添加了皮革水解物。该方法具有检验结果准确，灵敏度高、稳定性好、样品处理简单等诸多优点，但需要昂贵的离子色谱仪，难以推广使用。因此迫切需要一种简便、灵敏、可靠的乳皮革水解物的检验方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种乳中皮革水解物金标快速检测卡及其制备方法。

本发明提供的一种乳中皮革水解物金标快速检测卡，由样品层、金标层、检测层、吸水层、塑料衬板和塑料盖板组成；塑料衬板的首部是样品层前端，样品层的后端与金标层前端层叠相连，金标层后端与检测层前端层叠相连，检测层后端与吸水层前端层叠相连，吸水层后端位于塑料衬板的尾部；塑料衬板的上方覆盖有塑料盖板，塑料盖板上设有加样孔和观察孔，加样孔正对样品层，观察孔正对检测层上的检测线；

所述的样品层由玻璃纤维制成，吸水层由多层滤纸制成或玻璃纤维制成，检测层是硝酸纤维素膜，其上包被有皮革水解蛋白多克隆抗体制成的检测线，金标层是玻璃纤维，其上涂覆有胶体金标记的皮革水解蛋白。

一种乳中皮革水解物金标快速检测卡的制备方法，包括如下步骤：

(1)、胶体金标记的皮革水解蛋白溶液及金标层的制备

(a)胶体金溶液的制备：按柠檬酸三钠-氯金酸法制备胶体金溶液；