[发明专利]促性腺激素释放激素脂质体的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于哺乳动物免疫去势的去势疫苗技术领域，具体涉及促性腺激素释放激素脂质体的制备方法。

背景技术

促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone，GnRH)，又称促黄体素释放激素(Luteinizing hormone releasing hormone，LHRH)、促性腺激素释放因子(Gonadotropin-releasing factor，GnRF)，是由动物下丘脑分泌的一种十肽激素，其主要生物学功能是控制脑下垂体前叶细胞合成和分泌促黄体激素(Luteinizing hormone，LH)及促卵泡激素(follicle-stimulating hormone，FSH)。

促性腺激素释放激素(GnRH)不但通过影响垂体促黄体激素(LH)和促卵泡激素(FSH)的分泌，调节性腺功能，而且还直接作用于性腺。但促性腺激素释放激素(GnRH)对性腺的直接作用是抑制性的。在鼠等动物发现，在卵巢和睾丸上均存在促性腺激素释放激素(GnRH)受体，促性腺激素释放激素(GnRH)可直接与这些受体结合，对生殖功能有抑制作用，所以通过适当的方法调控促性腺激素释放激素(GnRH)的分泌或干扰其功能，就能够达到控制动物生殖器官发育和生殖功能的目的。促性腺激素释放激素(GnRH)免疫雄性动物可以使幼龄雄性动物睾丸停止发育和成年雄性动物睾丸退化。用促性腺激素释放激素(GnRH)免疫动物后，机体产生大量的抗促性腺激素释放激素(GnRH)的特异性抗体，与内源性的促性腺激素释放激素(GnRH)结合使其失去生物活性，从而导致下丘脑-垂体-睾丸轴功能的破坏，抑制促黄体激素(LH)和促卵泡激素(FSH)的释放，使被免疫的动物表现睾丸萎缩和重量减轻、血清睾酮水平下降。近年来，国内外学者在多种动物上用促性腺激素释放激素(GnRH)主动免疫的方法使动物体内产生抗体以中和内源的促性腺激素释放激素(GnRH)，取得了一定的效果。这种免疫去势方法简便，安全性高，可替代传统手术去势，控制动物性行为和繁殖能力，达到改善动物肉质，促进动物生长，提高饲料利用率。

目前，国内外在促性腺激素释放激素(GnRH)免疫去势制剂的研究方面也进行了不少工作，一般是将促性腺激素释放激素(GnRH)与载体蛋白结合或者是重组促性腺激素释放激素(GnRH)融合蛋白直接注射，其缺点是需要多次注射方可抑制动物的生殖功能，否则很难得到较好的效果，不得不增加使用剂量或使用频率，给其使用带来不便，不易在生产实际中应用。由此可见，延长促性腺激素释放激素(GnRH)制剂在动物机体内的作用时间，减少免疫次数显得尤为重要。因此，其“瓶颈”问题在于如何加强促性腺激素释放激素(GnRH)制剂给药技术的研究。脂质体作为药物载体具有长效作用。实验证明，脂质体及包封的药物以缓释方式释放，在血循环中保留的时间，要比游离药物长得多。而国内外在促性腺激素释放激素脂质体方面的研究技术还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种免疫去势的促性腺激素释放激素脂质体制剂的制备方法，促性腺激素释放激素脂质体可作为哺乳动物免疫去势的药物制剂，用于各种哺乳动物的免疫去势。

本发明具体制备方法包括以下操作步骤：

(1)将质量比为3∶1的磷脂酰胆碱75mg、胆固醇25mg放入无菌旋转蒸发瓶中，加入6ml混合有机溶剂溶解或6ml无水乙醇溶解，形成磷脂酰胆碱、胆固醇有机溶液；

(2)将盛有磷脂酰胆碱、胆固醇有机溶液的旋转蒸发瓶置于60℃水浴中，在旋转蒸发器上旋转预热20分钟后；启动旋转蒸发仪，80℃，旋转蒸发时间为2小时，除去有机溶剂，直至脂质膜均匀的沉积在旋转蒸发瓶壁上；继续负压抽吸20分钟后关闭旋转蒸发器，得磷脂酰胆碱、胆固醇脂质膜；

(3)将氮气通入含干燥的磷脂酰胆碱、胆固醇脂质膜的旋转蒸发瓶中，并将其放入真空干燥器，室温真空30分钟，得干燥的磷脂酰胆碱、胆固醇脂质膜；

(4)取10mg促性腺激素释放激素溶于10ml浓度为0.01mol/l的磷酸盐缓冲液中，得促性腺激素释放激素溶液；

(5)将含有干燥的磷脂酰胆碱、胆固醇脂质膜的旋转蒸发瓶在氮气流下加入促性腺激素释放激素溶液，将旋转蒸发瓶置于60℃水浴中，在旋转蒸发器上旋转30分钟，水化脂质膜；振摇容器，使贴壁的所有脂质从容器壁上脱落，形成均匀乳白的、无可见颗粒的促性腺激素释放激素脂质体悬液。