[发明专利]一种急性全身性猴帕金森病模型及其药物筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种急性全身性猴帕金森病模型及其药物筛选方法。

背景技术

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)的实验动物模型已有多种，包括小鼠、大鼠的外科损伤或6-羟多巴立体定向注射毁损的模型等。最有价值的模型动物应是和人类神经系统尤其是中脑基底节区有着相似结构、功能和复杂程度的物种。灵长类PD动物模型能够反映PD症状的基本特征，是目前最接近人类PD的动物模型，为PD的基础研究提供了良好的基础和平台。

MPTP(1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶)导致中枢神经系统黑质-纹状体区多巴胺能神经元损害。虽然偏侧猴帕金森病模型建模简单，建模成本低、模型成活率高，被广泛采用，但是，该模型症状仅局限于一侧，与疾病呈双侧发展不相符合，不能体现中晚期帕金森病的临床特征。因此，亟需建立全身性帕金森病猴模型以供实验研究需要。1984年，Jenner等[Jenner P.，Rupniak N.M.，Rose S.，et al.1-Methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahyropyridineinduced parkinsonism in the common mramoset.Neurosci Lett，1984，50：85-90.1]首次报道了使用MPTP注射建立全身性猴帕金森病模型的方法。尽管当时建立的动物模型仅表现为运动减少和僵直，并没有见到肢体震颤，但是，组织生化研究显示纹状体内多巴胺分泌减少了63-100％。之后，有学者提出了连续注射MPTP建立全身性帕金森病模型的方法，该方法可造成黑质致密部多巴胺能神经元损失超过95％，与终末期帕金森病患者脑病理改变相类似[Kunikowska G.，Jenner P..Alteraion in m-RNA expression for Cu，Zn-superoxide dismutase and glutathione peroxidase in the basal ganglia ofMPTP-treated marmosets and patients with parkinson’s disease.BrainRes，2003，968：206-218.]。目前，建立急性全身性帕金森病猴模型的给药途径包括：肌肉注射、皮下注射和静脉注射三种。由于静脉注射更接近人类应用MPTP的方式，并且不受组织吸收率等因素的影响，药物可快速进入颅内，容易控制用药量。因此，国内外学者多采用静脉注射的方法建立急性全身性帕金森病模型。但是，值得注意的是，各个研究报道的静脉给药方式和给药剂量有很大的不同。Stanley等[Stanley B.R.，Chuang C.C.，Sanford D.M.，et al.Aprimate model of parkinsonism：selective destruction of dopaminergic neuronsin the pars compacta of the substantia nigra byN-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine.Proc Natl AcadSci，1983，80：4546-4550.]对四只猴分别通过分次静脉注射1.75-2.49mg/kgMPTP溶液，建立了急性重度全身模型。国内陈生弟等[陈生弟，徐德隆，余慧贞等.MTPT在恒河猴帕金森病模型上的应用及其作用机制的研究.中华神经精神科杂志，1990，23(1)：23-27.]分次为两只猴注射2.45mg/kg和3.5mg/kgMPTP后，出现严重的帕金森病症状。Hansard等[Hansard M.J.，Smith L.A.，Jckson M.J，et al.Dopamine，but not norepinephrineor serotonin，reuptake inhibition reserves motor deficits in1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine treatmented primates.J PharmacolExp Ther，2002，303：952-958，MJ Hansard，LA Smith，MJ Jackson，et al.Dopamine reuptake inhibition and failure to evoke dyskinesia in MPTP-treatedprimates，Eur.J.Pharmacol.451(2002)157-160.]报道在5天内连续注射总剂量为2mg/kg的MPTP建立急性全身模型的方法。由于该模型症状明显而典型，被认为特别适合于左旋多巴引起的运动不能的病理生理机制的研究[MP Hill，P Ravenscroft，E Bezard，et al.Levetiracetam potentiates the antidyskinetic actionof amantadine in the 1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine(MPTP)-lesioned primate model of Parkinson’s disease.J Pharmacol ExpTher，2004，310：386-394.，P Jenner.The MPTP-treated primate as a model ofmotor complicationsin PD：primate model of motor complications.Neurology，2003，61：S4-S11.]；也可用于帕金森病神经保护药及多巴胺受体激动剂等药物治疗的研究[CJ Hille，SH Fox，YP Maneuf，et al.Antiparkinsonianaction of a delta opioid agonist in rodent and primate models of Parkinson’sdisease，Exp.Neurol.172(2001)189-198.；[10]MM Iravani，S Costa，MJJackson，et al.GDNF reverses priming for dyskinesia in MPTP-treated，1-DOPA-primed common marmosets.Eur J Neurosci，2001：13：597-608.；RKPearce，M Jackson，DR Britton，et al.Actions of the D1 agonists A-77636 andA-86929 on locomotion and dyskinesia in MPTP-treated 1-dopa-primed commonmarmosets.Psychopharmacology，1999，142：51-60.]，但是，该方法建立的猴帕金森病模型症状严重，模型猴活动能力受到严重影响，并出现饮水和进食困难，需要使用左旋多巴类药物治疗，因此饲养难度大，模型猴容易死亡。为解决这一问题，Iravani等[M Iravani，E Syed，MJ Jackson，et al.A modifiedMPTP treatment regime produces reproducible partial nigrostriatal lesions incommon marmosets.Eur J Neurosci，2005，21：841-854.]降低MPTP用量，使用1mg/kg MPTP建立的猴帕金森病模型，其多巴胺能神经元损失只有60％，模型猴症状轻微，容易存活，适合于疾病早期阶段的各项研究；但是，该模型由于症状轻微，在短期内出现症状消失。和占龙，等，恒河猴帕金森氏病模型的建立和重组人NTN对黑质多巴胺能神经元的保护作用的实验观察，《中国现代实用医学杂志》，2005年4卷5期，其中公开了恒河猴帕金森氏病模型的建立方法为：猴下肢隐静脉注射MPTP，用药剂量和时间为：首先按0.3mg/kg给药，1次/d，共4d，然后按0.38mg/kg，1次/d，共3d，总共给MPTP7d。虽然降低了剂量，但制备的动物模型稳定性差。