[发明专利]水溶性蛋壳膜多肽的制作方法

说明书

本发明是关于一种与人体真皮纤维芽细胞的亲和性高、促进细胞黏着和增殖、促进细胞外基质成分的合成、具有水溶性及热稳定性高的蛋壳膜多肽的制作方法。是将鸟类的蛋壳膜在含BaH₄碱性条件下进行水解，制作出水溶性蛋壳膜多肽的简易方法。

蛋壳膜自古以来涂在火伤、擦伤、裂伤等患部，就具有抑制炎症和促进上皮形成的效果。作为化妆品原料，蛋壳膜在改善皮肤粗糙、抗老化作用等方面的功效备受期待。但是，由于制作方法的繁琐以及蛋类特有的硫化氢的异味、蛋白分解臭味等原因，一直没有得以广泛利用。水溶性蛋壳膜的制作方法在日本受到多方各界的研究，现在已知的方法有：蛋白分解酶、碱水解、碱性含水有机溶媒等。这些方法全都要将蛋壳膜从蛋壳中分离，蛋白分解酶需要在50℃下处理20小时，碱性含水有机溶媒需要5小时以上的处理时间。无论使用以上哪种方法，水解后都必须用活性炭或离子交换树脂进行去臭、脱色工序。

本发明的目的在于追求8kDa分子量蛋壳膜多肽的抑制皮肤炎症、促进上皮形成等功效的同时，寻求简单的新型制作方法。为此发明人经过多番研究实践，事前不分离蛋壳膜，在含BaH₄碱条件下水解，可以得到水溶性蛋壳膜多肽，并且发现此水溶性蛋壳膜多肽能有效促进皮肤纤维芽细胞的亲和性和细胞增殖。

具体实施方法

本发明所说的蛋壳膜多肽是将鸟类蛋壳内侧的蛋壳膜水解后得到的。

蛋壳膜多肽的制作方法：

打破鸡蛋，清洗蛋壳，加入蛋壳2倍量的脱离子水，然后加入BaH₄和NaOH(最终浓度分别为1mM和20mM)，在100℃下加热60分钟。收集溶解物，用过滤或离心分离等方法进行澄清，用排出界限为3kDa的超滤模块过滤。截留(分子量3kDa以上)收集、冷冻干燥。本蛋壳膜多肽的平均分子量为8kDa，氨基酸构成如表1所示。分子量为SDS-PAGE，采用氨基酸自动分析法。

表1蛋壳膜多肽的氨基酸构成

  氨基酸  g/100g  精氨酸  2.56  赖氨酸  0.99  组氨酸  2.12  苯丙氨酸  1.10  酪氨酸  1.24  亮氨酸  2.96  异亮氨酸  2.10  蛋氨酸(※)  2.70  缬氨酸  4.94  丙氨酸  2.10  甘氨酸  5.20  脯氨酸  6.14  谷氨酸  9.34  丝氨酸  1.96  苏氨酸  1.84  天门冬氨酸  6.20  色氨酸  2.24  胱氨酸  1.39