[发明专利]一种中药两头尖中竹节香附素A含量高效液相色谱检测方法

说明书

发明领域

本发明涉及中药两头尖的检测方法，特别涉及中药两头尖及其制剂的含量检测方法。

背景技术

两头尖又名竹节香附，为两头尖为毛莨科植物多被银莲花Anemone raddeanaRegel的干燥根茎。主要分布于东北三省及山东、河北、山西等地，以吉林省产量最多。药材多夏季采挖，除去残茎及须根，晒干。此药首载于明朝刘文泰所著《本草品汇精要》。具有“祛风除湿，消痈肿”之功效。早在清代，王旭高的“定癌散”曾以两头尖治疗乳癌。现在临床用于风寒湿痹，手足拘挛，骨节疼痛，痈疽肿痛。多与其它药物配伍，不单方入药，是著名中成药“活络丹”和“再造丸”的主要原料。本品富含三萜皂苷类，其中三萜皂甙银莲花素A为抗肿瘤的主要有效成分之一。

关于两头尖药材中的银莲花素A检测方法，在现有技术中均为采用高效液相色谱法使用紫外检测器检测进行含量测定，由于是皂苷类成分，在紫外吸收光谱上，只有末端吸收，通常紫外波长选择为206nm左右作为测定波长，因此色谱峰响应值低，灵敏度差，流动相及杂质干扰较严重，从而使整个方法重现性不好，测定结果误差很大。2010年版中国药典一部两头尖项下，采用甲醇索氏提取、乙醚脱脂、水饱和正丁醇反复萃取的样品处理方法，并辅以乙腈与0.1％磷酸溶液梯度洗脱方式为流动相的色谱条件，才得以完成高效液相色谱法-紫外检测器检测银莲花素A的含量，样品处理时间约10～15小时，由于供试品处理方法繁琐，易导致测定结果误差，梯度洗脱方式的流动相又极易使色谱峰分离基线不稳。并且采用上述现有方法对成药中两头尖药材银莲花素A含量测定，几乎无法进行。

发明内容

本发明提供一种中药两头尖中竹节香附素A含量高效液相色谱检测方法，以解决现有技术中存在的操作复杂、重现性差、灵敏度低的问题，该方法适用于两头尖药材、两头尖制剂的质量控制。本发明采取的技术方案是：采用蒸发光散射检测器，以外标两点法定量，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇或乙腈与水的混合液作为流动相，流动相的流速为每分钟0.2～1ml；样品预处理采用甲醇超声处理法。

本发明方法包括以下步骤：

1、色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为80～93∶20～7的乙腈-水或82～95∶18～5的甲醇-水；蒸发光散射检测器检测；流动相的流速为每分钟0.2～1ml；蒸发光散射检测器检测的漂移管温度：60～130℃，空气流速：1.0～3.1L/min。

2、对照品溶液的制备：精密称取竹节香附素A对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；

3、供试品溶液的制备：取两头尖粉末2～8g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理0.5～1小时，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；量取续滤液10ml，水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得；

4、测定法：精密吸取对照品溶液5μl、15μl，供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，以外标二点法对数方程计算，即得；

有益效果：本发明采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定中药两头尖中竹节香附素A的含量，操作方法相比已有方法十分简单。方法学验证表明，该法分离效果良好，方法线性、稳定性、重现性、加样回收率等方法学考察均符合定量测定的要求。能够更有效地控制中药两头尖及其制剂的产品质量。样品处理时间约0.5小时，大大提高了检测效率，减少了环境污染，节约了检测成本，方法简便、快捷、准确。

本发明还适合用两头尖作为原料药或原料药之一的制剂，包括片剂、粒剂等临床或药学上可接受的常用剂型。

附图说明

图1是对照品竹节香附素A蒸发光散射检测器检测图谱；

图2是两头尖药材蒸发光散射检测器检测图谱；

图3是前列通片蒸发光散射检测器检测图谱。

具体实施方式

仪器：日本岛津LC-10Atvp高效液相色谱仪，浙江大学2010双通道色谱工作站；美国奥泰ELSD2000ES蒸发光散射检测器；梅特勒.托利多AB265-S电子天平。

试药：竹节香附素A化学对照品，含量测定用，中国药品生物制品检定所，纯度经检查符合含量测定用化学对照品的技术要求，含量为≥98％；甲醇：色谱纯，水：自制双蒸水；

样品：中药两头尖药材。前列通片，批号：20100225(广州中一药业有限公司)

实施例1