[发明专利]新型抗EGFR人源抗体MIL27的制备及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及新型抗体及其用途。基于EGFR与功能性抗体相互作用空间结构，利用计算机辅助合理评价EGFR蛋白与功能性抗体作用动态模式及功能性抗体特异性识别EGFR胞外区功能域的表位结构特征、理化性质，通过虚拟筛选与辅助分子设计相结合合理设计、获得新型抗EGFR人源抗体MIL27。应用分子生物学技术进行基因全合成和蛋白表达，并通过免疫学实验以及细胞生物学实验对新抗体的功能进行评价。 

背景技术

人表皮生长因子受体(EGFR)基因位于第7号染色体p 13～q22区，全长200kb，由28个外显子组成，编码1186个氨基酸，形成的EGFR单链糖蛋白分子量约170kDa。EGFR是细胞信号传导和细胞分化的重要分子之一[N.Prenzel，O.M.Fischer，S.Streit，S.Hart，A.Ullrich，The epidermalgrouth factor receptor family as a central element for cellularsignaltransduction and diversification.Endocrine-related cancer 8(2001)11-31]。EGFR胞外区(ECD)N-端621个氨基酸残基为配体结合区，由Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四个亚区(或相应称为L1、S1/CR1、L2、S2/CR2亚区)构成。Ⅰ和Ⅲ区富含亮氨酸；Ⅱ和Ⅳ区富含半胱氨酸，全部50个半胱氨酸残基参与形成25个分子内二硫键。另外胞外区存在12个潜在的N-糖苷键连接的糖基化位点，其中Ⅰ、Ⅱ区各有2个，Ⅲ、Ⅳ区各有4个。研究表明，EGFR的糖基化作用与其参与结合配体及自身同型二聚化有关。EGFR跨膜(TM)区由23个氨基酸残基构成的疏水区，为单链α螺旋。EGFR胞内区共542个氨基酸残基，由近膜区(JM)、酪氨酸激酶(TK)区、C-末端区三个亚区构成。近膜区的前13个氨基酸(645～657)是介导胞内二聚化作用所必需。自身磷酸化位 点位于C-末端，其中Tyr1068、1148、1173为主要位点，Tyr992、1086为次要位点，与信号传递密切相关。EGFR的过度表达或异常激活，常常引起细胞恶性转化，从而与肿瘤的发生、发展为恶性以及肿瘤手术预后等密切相关。EGFR在多种类型的人类实体瘤中过表达，包括肺癌、结肠癌、乳腺癌、胃癌、脑癌、膀胱癌、头颈部肿瘤、卵巢癌、胃癌、前列腺癌以及肝癌等[D.C.Moditahedi H，The receptor for EGF and its ligands：Expression，prognostic value and target for therapy in cancer.Int J Oncol(1994)277-296]。 

目前EGFR靶向性治疗肿瘤的药物主要分为两类：EGFR单克隆抗体和小分子化合物酪氨酸激酶拮抗剂。酪氨酸激酶拮抗剂主要为小分子喹啉类化合物，能够竞争性抑制ATP与EGFR胞内酪氨酸激酶结构域的结合，进而影响酪氨酸残基磷酸化，抑制EGFR下游的信号转导。EGFR单克隆抗体是与内源性配体竞争结合EGFR，通过抑制酪氨酸激酶的激活、促进EGFR内化等作用产生抗肿瘤效应，包括抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADC C)等。下面介绍一下3种已经上市的抗EGFR单克隆抗体，与其他化疗药相比，这些抗体作用特异性强，副作用小，在临床上取得了较好的疗效。