[发明专利]一种与乳腺癌相关的血清/血浆miRNA标志物及其应用

说明书

发明领域

本发明属于基因工程及肿瘤学领域，涉及一种与乳腺癌相关的血清/血浆miRNA标志物及其应用。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤。据估计，全球2002年新发乳腺癌病例达115万，占女性全部恶性肿瘤发病的23％，预计2010年将达到140-150万。在我国，乳腺癌的发病率与西方国家相比较低，但近二十年来，其呈现显著增长趋势，平均年增长率达3-4％，远远高于0.5％的世界平均增长水平。虽然乳腺癌的预后较好，但是由于其发病率较高，仍然是女性因癌症死亡的首要原因。在我国北京，上海，天津等城市乳腺癌发病率已高居女性恶性肿瘤发病的第一位、第二位。在2000年到2005年这5年间，我国女性乳腺癌患者增加了38.5％，每年因乳腺癌死亡的女性达1.3万人。乳腺癌已成为威胁我国女性健康的首要恶性肿瘤，是亟待解决的重大公共卫生问题。

乳腺癌目前虽无特殊的预防措施，但是若能早期发现、早期诊断、早期治疗，预后情况一般较好。所以，当前及将来相当一段时间内，争取早期诊断仍是乳腺癌防治的一项基本策略。目前早期诊断乳腺癌的方式主要有乳腺自检，乳腺钼靶X线摄影、乳腺彩色多谱勒超声检查、乳腺导管内视镜检查、乳腺导管灌洗、CT和磁共振等，若有无法辨别的肿块或脓肿可进行细胞学穿刺检查。尽管近年来乳腺癌的诊断水平不断上升，但真正较为成熟或有较好应用前景的乳腺癌诊断手段尚不多，有些早期乳腺癌患者由于肿块较小，或浸润较轻、呈膨胀性生长、表现为光滑、活动、边界清楚，与良性肿瘤不易区别。此外，由于涉及社会文化伦理等方面问题，一些年轻女性对于乳腺检查容易忽视或产生抗拒心理，不但不能保证诊断对癌症患者诊断的准确性，对于处于早期阶段的乳腺癌患者，尤其是年轻患者的诊断能力更为有限。因此，我们亟需发现更加明确而有效的生物标志物，对乳腺癌做出明确的早期诊断，这将有助于乳腺癌患者做出早期治疗，提高生存率。

MicroRNAs(即miRNAs)是近年来肿瘤分子生物学研究领域的一个热点，它的成熟状态是一类长约19-23个核苷酸的小单链RNA分子，进化上具有高度保守性。它广泛存在于真核生物中，是一组不编码蛋白质的短序列RNA，其本身不具有开放阅读框(ORF)。MiRNA的主要功能是调节生物体内在的与机体生长、发育、疾病发生过程有关的基因的表达。自从参与调控线虫时序发育的lin-4与let-7被发现以来，miRNA分别在2002年和2003年两度入选Science杂志年度十大科技突破。2005年预测miRNAs至少能调控5300个人类基因，即所有基因的30％。随着研究的深入，越来越多的miRNAs不断被发现。聚光灯下的miRNA已经逐步摆脱了DNA光芒的掩盖，从“配角”变成“主角”，并且对DNA的中心地位提出了新的挑战。近年来，miRNA与肿瘤的关系已经成为研究的热点和重点，已经发现miRNA通过负调控基因的表达与肺癌，乳腺癌，胃癌，乳腺癌等的发病高度相关。

研究已经证实血清/血浆中存在几百种的miRNAs，这些小分子RNAs性质稳定、含量丰富、易于定量检测，且存在显著的疾病特异性。现有的成熟的技术，包括定性和定量miRNA分子的技术，表明利用血清miRNAs作为分子生物标志物的方法比传统的特异蛋白分子标记方法将更加有效，为生物标志物开拓了新境界。

然而，目前还没有用于乳腺癌诊断的较为稳定的生物标志物的报道，若能筛选出乳腺癌异常表达的血清/血浆miRNAs作为生物标志物，并研制相应的诊断试剂盒，对我国乳腺癌的诊断现状必将是一次有力的推动。

发明内容

本发明的首要目的是针对上述技术问题，提出一种与乳腺癌相关的血清/血浆miRNA标志物。

本发明的第二个目的是提供上述血清/血浆miRNA标志物的引物。

本发明的第三个目的是提供上述血清/血浆miRNA标志物及其引物在制备乳腺癌辅助诊断试剂盒中的应用。

本发明第四个目的是提供辅助乳腺癌诊断的试剂盒。

发明人通过分离和研究乳腺癌患者及与其年龄匹配的健康女性对照血清/血浆中的miRNAs，寻找一组与乳腺癌高度相关的高特异性和敏感性的miRNAs，并研制出可便于临床应用的乳腺癌诊断试剂盒，为乳腺癌的筛查和诊断提供数据支持，为发现具有潜在治疗价值的新型小分子药物提供数据支持。

本发明的目的是通过下列技术方案实现的：

一种与乳腺癌相关的血清/血浆miRNA标志物，该标志物为miR-16、miR-25、miR-222和miR-324-3p的组合。

所述的血清/血浆miRNA标志物的引物，这些引物为：