[发明专利]绿色木霉真菌及其菌剂的制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及植物病害生物防治领域，具体地说涉及一种能够防治多种植物病害的绿色木霉菌株，以及利用该菌株制备生防菌剂的方法和该生防菌剂的应用。 

技术背景

植物病害是农业生产的大敌，据联合国粮农组织(FAO)统计每年因植物遭受病害造成的减产平均损失为总产量的10％～15％。几个世纪以来，化学农药在植物病虫草害的防治工作中发挥着积极的作用，为农业的稳产、增产及挽回损失等做出了重要的贡献。但过量施用和滥用农药业导致了许多负面影响，如地力衰退、环境污染、产生抗药性等。尤其近年来，农产品中农药残留超标造成人畜中毒事件不断发生，严重威胁了人们的生活质量，限制了我国农产品的外贸出口。随着社会文明的发展进步，人们对无污染、无公害绿色食品呼声日益提高，生物防治已经成为植物病害防治的研究热点，它在生产方式、食品安全、营养健康、生态平衡和生物多样性上都和人类未来的发展方向具有良好的相融性。 

生防菌作为生物防治的重要一环，一直是植物病害生物防治研究的热点。生防菌的种类繁多，生产上广泛应用的有真菌、细菌、放线菌等。其中木霉菌(Trichoderma.spp)是被人们较早研究并被开发应用到生产中的生防微生物。它广泛存在于土壤、植物根际种子表面等生态环境中，易于分离和培养，而且对许多病原真菌和病原细菌有拮抗作用，具有良好的生防应用前景。该属真菌具有生长速度快，适应性强，产孢量大等优点，有的菌丝体内还有厚垣孢子，易于工业化生产，并能产生多种抗生物质及酶类，抑制或减弱病原菌产生抗药性。因此，在发展可持续农业呼声越来越高的今天，它作为一类资源丰富的拮抗微生物，在植物病害生物防治中具有举足轻重的作用。据不完全资料统计，木霉至少对18个属29种病原真菌在体外或体内有拮抗作用，已广泛用于多种植物真菌病害的防治，特别是对丝核菌、镰刀菌、齐整小核菌、疫霉菌、腐霉菌、链格孢菌等引起的病害具有较好的防治效果。国内外许多科研人员也已成功的利用木霉菌防治了许多重要的植物病害，如辣椒白绢病，豇豆枯萎病，棉花立枯病及猝倒病等。近年来，采用木霉菌防治纹枯病的研究也屡见报道。 

随着人类对生态环境的进一步重视以及农业可持续性发展的需要，生物防治技术势必将进一步发展，特别是现代生物技术的应用必然会开拓生防科技的新领域。微生物农药的研究和应用在新世纪之初迎来一个前所未有的历史机遇和技术挑战，产业发展前景十分广阔。因此，微生物农药在未来的10～20年里将迅速发展，在保护环境、保证人类健康，在促进农业可持续发展进程中发挥愈来愈重要的作用。 

发明内容

本发明旨在为多种植物病害提供一种可用于生物防治的具有高效、广谱杀菌活性的绿色木霉菌株，以及利用该菌株制备生防菌剂的方法，此外，还提供了这种绿色木霉在植物病害防治上的应用。 

本发明的目的是通过以下方案实现的。 

本发明的绿色木霉真菌菌株命名为绿色木霉(Trichoderma viride)菌株ZBS6，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No.3538，保藏日期为：2009年12月23日。其菌落在PDA培养平板上圆形或近圆形，菌丝生长初期为白色绒状，后期呈现同心轮纹状的浓绿产孢区。显微镜下观察，菌丝纤细无色，具分隔，多分枝；分生孢子梗从菌丝的侧枝上生出，呈环状排列，具几次重复分枝，着生分生孢子的小梗瓶形或锥形；分生孢子多为球形，绿色或蓝绿色。 

本发明所提供的生防菌剂，由绿色木霉(Trichoderma viride)菌株ZBS6制备而成，为液态或固态菌剂。 

上述生防菌剂的制备方法为： 

(1).液态菌剂制备方法 

将保存的绿色木霉菌株ZBS6移入PDA培养基平板上，26℃光暗交替培养4d，无菌条件下刮取分生孢子，用无菌水配制1×10⁷的分生孢子悬浮液，按1ml孢子悬浮液/100ml PDB培养基进行接种，置于26℃，150rpm条件下振荡培养3d，电动搅拌器以2000rpm转速搅拌2min，与1.9L磷酸缓冲液混合(内含0.1％的助剂吐温100和0.2％的防腐剂苯甲酸)，即得到液态生防菌剂。 

(2).固态菌剂制备方法 

将保存的绿色木霉菌株ZBS6移入PDA培养基平板上，26℃光暗交替培养4d，无菌条件下刮取分生孢子，用无菌水配制1×10⁷的分生孢子悬浮液，按2ml孢子悬浮液/100g基质培养基进行接种，26℃光暗交替培养8-10d后，混匀即得固态生防菌剂。