[发明专利]利用木瓜蛋白酶酶解牛皮胶原蛋白制备抗冻多肽无效
| 申请号： | 201010277410.2 | 申请日： | 2010-09-10 |
| 公开（公告）号： | CN101921311A | 公开（公告）日： | 2010-12-22 |
| 发明（设计）人： | 汪少芸;陈琳;郑邦晓;饶平凡 | 申请（专利权）人： | 福州大学 |
| 主分类号： | C07K7/06 | 分类号： | C07K7/06;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16;C12P21/06 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350108 福建省福州市*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 木瓜蛋白酶 牛皮 胶原 蛋白 制备 多肽 | ||
1.一种抗冻多肽，其特征在于：所述多肽的氨基酸序列为HyP-Gly-Met-Hyl-Gly-His-Arg-Gly。
2.根据权利要求1所述的抗冻多肽，其特征在于：所述抗冻多肽的分子量为877 Da。
3.一种抗冻多肽的制备方法，其特征在于：以牛皮胶原蛋白为原料，采用木瓜蛋白酶对其进行酶解，分离纯化、冷冻干燥得到抗冻多肽；所述酶解条件为：pH为7-10、温度30-50℃、酶解时间为20-60min、酶-底物配比为1:10－1：20（w/w）；所述酶为木瓜蛋白酶。
4.根据权利要求3所述的抗冻多肽的制备方法，其特征在于：采用木瓜蛋白酶对其进行酶解，分离纯化、冷冻干燥得到抗冻多肽；所述酶解条件为：pH为7.0、温度是37℃、酶解时间为30分钟、酶-底物配比为1:10（w/w）。
5.根据权利要求3所述的抗冻多肽的制备方法，其特征在于：所述分离纯化的手段包括Sephadex G-50分子筛、Sepharose SP C-25离子交换色谱和RP-HPLC反相高效液相色谱。
6.根据权利要求4所述的抗冻多肽的制备方法，其特征在于：所述分离纯化的具体步骤为：酶解产物首先利用Sephadex G-50凝胶色谱进行分离，洗脱液为去离子水，流速为2mL/min，洗脱峰在225nm下进行测量；收集具有最佳抗冻活性的峰，再用Sulfopropyl-Sepadex C-25阳离子交换色谱进行分离，洗脱液为NaCl浓度梯度为0-0.5M的0.01mol/L pH7.0的磷酸缓冲液，流速为0.5mL/min；收集具有最佳抗冻活性的峰，利用RP-HPLC反相高效液相色谱再进一步的分离，反相HPLC的分离以10-90% 乙腈溶液作为洗脱液，流速为1mL/min，得到高纯度的特异性抗冻多肽。
7.根据权利要求6所述的抗冻多肽的制备方法，其特征在于：所述高纯度的特异性抗冻多肽的分子量为877 Da。
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