[发明专利]一种长期保藏微生物菌种的方法无效
申请号: | 201010277464.9 | 申请日: | 2010-09-09 |
公开(公告)号: | CN102399696A | 公开(公告)日: | 2012-04-04 |
发明(设计)人: | 丁国才 | 申请(专利权)人: | 上海海帝园艺有限公司 |
主分类号: | C12N1/04 | 分类号: | C12N1/04;C12R1/02 |
代理公司: | 上海汉声知识产权代理有限公司 31236 | 代理人: | 郭国中 |
地址: | 201109 上海*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 长期 保藏 微生物 菌种 方法 | ||
技术领域
本发明涉及一种微生物的保藏方法,尤其涉及一种长期保藏微生物的方法。
背景技术
菌种是国家的重要资源,是从事微生物学以及生命科学研究的基本材料,特别是利用微生物进行有关生产更离不开菌种。所以,菌种保藏是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分,其任务是采用最合适的保存方法,使菌种的变异和死亡减少到最低限度。
微生物菌种中醋酸菌的常规保藏方法是斜面保藏和液体石蜡保藏,需要定期传代。但醋酸菌不同于其它菌种,它非常容易变异,而定期的斜面传代又增加了退化和变异的几率,这样会使优选获得的宝贵菌种资源得而复失,甚至会给工业生产造成很大的损失及危害。
发明内容
本发明提供一种能够保藏时间长,不易变异的微生物的保藏方法,了为实现该技术目的,其技术方案如下:
一种长期保藏微生物菌种的方法,包括以下步骤:
(1)培养基的重量配比为:酵母膏0.5~2%,葡萄糖0.5~2%,碳酸钙1~3%,水93%~98%;
(2)培养基分装灭菌:将培养基组份混溶后倒入三角瓶内,灭菌20~30min,在无菌室内待培养基冷却至40~70℃时加入除菌的无水乙醇水溶液,分装试管摇匀,摆成斜面,冷却后20~40℃培养40~60h,如果干净无菌,可用于下一步的菌种培养;
(3)接种培养保藏:把菌种接种到斜面培养基上,20~40℃培养20~30h,将经过干热灭菌的碳酸钙少许加入到斜面上,将液体试管培养基灌入试管内,换上灭菌的橡皮塞,置冰箱2~4℃保藏。
如上所述的长期保藏微生物菌种的方法,其中所述的微生物菌种为醋酸菌。
如上所述的长期保藏微生物菌种的方法,其中在步骤(1)中的培养基的重量配比为:酵母膏1%,葡萄糖1%,碳酸钙1%,水97%。
如上所述的长期保藏微生物菌种的方法,其中在步骤(2)中的培养基灭菌时间为25min。
如上所述的长期保藏微生物菌种的方法,其中在步骤(2)中灭菌后冷却的温度为60℃。
如上所述的长期保藏微生物菌种的方法,其中在步骤(2)中加入的除菌的无水乙醇水溶液的浓度是4%。
如上所述的长期保藏微生物菌种的方法,其中在步骤(2)中将试管摆成斜面后冷却至30℃,培养48h。
如上所述的长期保藏微生物菌种的方法,其中在步骤(3)是在菌种接种后,在30℃下培养24h。
如上所述的长期保藏微生物菌种的方法,其中在步骤(3)中的碳酸钙在200℃下灭菌2h。
如上所述的长期保藏微生物菌种的方法,其中在步骤(3)中的,液体试管培养内液体的高度为2cm。
采用了本发明提供的微生物保藏方法,与现有技术相比其有益效果体现在:
(1)能够减少传代次数,即减少变异的机率对于一般的冷冻干燥设备就可以起到很好的保藏效果。
(2)此方法制作简单,保藏期可达2年,用时用斜面培养基活化2次,即可投入生产,不需要繁琐的操作过程。
(3)不需要任何昂贵的仪器,即可以达到保藏的目的,适于大规模生产并且可以降低成本,减少能耗。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行详细说明:
本发明的实施例所使用到的材料和仪器:
菌种:恶臭醋酸杆菌(Acetobacter Rancens as 1.41):购于中国科学院微生物研究所。
培养基:(1)斜面培养基:酵母膏1%,葡萄糖1%,碳酸钙2%,其余为水。融化后倒入三角瓶内,于0.1MPa灭菌30min,在无菌室内待培养基冷却至60℃时加入除过菌的4%无水乙醇。分装试管摇匀,摆成斜面,冷却后30℃培养48h。观察试管斜面干净无菌,方可用于实验;2)液体培养基:酵母膏1%,葡萄糖1%,其余为水。分装试管于0.1MPa灭菌30min,在无菌室内待培养基冷却至60℃时加入除过菌的4%无水乙醇,30℃培养2d,观察试管内清亮无菌,方可用于实验;(3)产酸培养基:其三角瓶增殖培养基为5°Bx-6°Bx麦芽汁糖化液,磷酸二氢钾0.05%,硫酸镁0.03%,分装三角瓶,装量为20mL/300mL三角瓶,用中间为棉花的6层纱布和牛皮纸封口,0.1MPa灭菌30min,在无菌室内待培养基冷却到60℃时,加入除过菌的4%无水乙醇,30℃培养2d,观察培养基清亮无菌,才能进行实验,产酸培养基的含量及制作方法均同三角瓶增殖培养基,培养基装量为100mL/1000mL三角瓶,无菌室内加入除过菌的5.5%无水乙醇。
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