[发明专利]利用颠茄托品酮还原酶I型基因提高颠茄莨菪烷类生物碱含量的方法

权利要求书

1.一种分离出的DNA分子，其特征在于，它包括：具有编码颠茄托品酮还原酶（tropinone reductase，TR）I型（TR-I）基因核苷酸序列的编码区，采用引物f-TR-I：5’-GAAGATCTATGGAAGAATCAAAAGATAACA-3’和r-TR-I：5’-GGGTGACCTAAAA TCCACCATTAGCAGTG-3’从颠茄中扩增出来。

2.一种植物表达载体，它包含上述颠茄的TR-I基因核苷酸的编码区。

3.一种利用基因工程技术提高颠茄中莨菪烷类生物碱含量的方法，特征在于构建携带权利要求1中的DNA分子的植物高效表达载体，采用转基因方法在颠茄细胞、组织、器官、植株中过量表达权利1中的DNA分子，其步骤如下：

（1）采用基因克隆方法获得来源于颠茄的的TR-I基因的编码区，即TR-I基因核苷酸的编码区：克隆颠茄TR-I基因编码区的引物为：f-TR-I：5’- GAAGATCTATGGAAGAATCAAAAGATTA CA -3’，作为上游引物，携带Bgl II酶切位点；r f-TR-I：5’- GGGTGACCTAAAATCCACCATTAGCAGT G-3’，作为下游引物，携带BstE II酶切位点；

（2）把来源于颠茄的TR-I基因核苷酸的编码区连于表达调控序列，形成高效植物表达载体； 

（3）获得颠茄无菌外植体；

（4）采用转基因方法转移来源于颠茄的TR-I基因的编码区到颠茄细胞、组织、器官、植株中；

（5）筛选和鉴定转化子：在离体培养的条件下用抗生素卡那霉素、潮霉素或G418选择出有抗生素和草胺膦、草甘膦抗性的颠茄的转化子；使用PCR、Southern杂交、Northern杂交或Western印迹方法来鉴定颠茄的转化子；

（6）培养转化子，获得转基因后代：对经过鉴定的转化子离体培养，并检测TR-I基因的表达水平，筛选TAs高产的优良转化子进行培养，获得转基因后代。

4.一种用权利要求2所述的植物表达载体转化的宿主细胞，该宿主细胞是颠茄。