[发明专利]发酵萎缩芽孢杆菌制备Bacillamide C的培养基及其制备及应用方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种细菌培养技术领域的培养基及其制备，具体是一种发酵萎缩芽孢杆菌制备Bacillamide C的培养基及其制备及应用方法。 

背景技术

与陆地生物相比，海洋生物生活于高盐、高压、低温、稀营养等条件严苛的环境中。为求生存，很多海洋生物在长期的进化过程中产生一些结构独特的化学物质。从海洋生物中已发现多种活性物质，包括抗肿瘤化合物、肿瘤促进剂、抗炎症/过敏化合物、抗菌、抗病毒化合物、生物毒素、抗寄生虫化合物、多不饱和脂肪酸等，其中相当部分生物活性物质是陆地生物所没有的。这些海洋生物活性物质具有种类繁多、结构特异复杂等特点。在众多海洋生物中，海绵是目前发现活性物质最丰富的海洋生物之一，人们对海绵活性物质寄予极大的希望，但海绵体内的活性物质含量很低，捕捞海绵资源有限，药源的供给不足使得海绵药物开发明显滞后。为寻找稳定可靠的药源，进行大规模生产，开展相关海绵共附生微生物的研究是迫切而重要的工作。 

经过对现有技术的检索发现，于璐璐等(Lu-Lu Yu et al.，Helvetica Chimica Acta2009；92：607-611)从来自中国南海的贪婪倔海绵萎缩芽孢杆菌Bacillus atrophaeus C89菌液的乙酸乙酯萃取物中，分离到一种结构较新的化合物Bacillamide C。Bacillamides家族化合物及其衍生物已被证实对多环旋沟藻、蓝藻和微藻有不同程度的抑制作用。藻类引起的赤潮和水华对生态、经济和人类健康的威胁日益严重，因而该家族作为潜在的抑藻剂有很高的研究价值和应用价值。 

发明内容

本发明针对现有技术存在的上述缺点，提供一种发酵萎缩芽孢杆菌制备Bacillamide C的培养基及其制备及应用方法，不仅能满足摇瓶实验的需要，亦能满足发酵罐发酵大量制备Bacillamide C的要求。 

本发明是通过以下技术方案实现的： 

本发明涉及一种用于萎缩芽孢杆菌的培养基，其组分及含量为：3.64g/L玉米淀粉、6.0g/L胰蛋白胨、6.29g/L碳酸钙、4.0g/L大豆蛋白胨、0.10g/L半胱氨酸和0.02g/L色氨酸，溶剂为人工海水。 

所述的人工海水的组份及含量为：26.518g/L的NaCl、2.447g/L的MgCl₂、3.305g/L的 MgSO₄、1.141g/L的CaCl₂、0.725g/L的KCl、0.202g/L的NaHCO₃以及0.083g/L的NaBr，溶剂为Millpore超纯水，该人工海水的pH 7.0-7.2。 

本发明涉及上述用于萎缩芽孢杆菌培养基的制备方法，包括以下步骤： 

第一步、配制人工海水：分别将NaCl、MgCl₂、MgSO₄、CaCl₂、KCl、NaHCO₃以及NaBr溶解于超纯水中后进一步混合。 

第二步、在人工海水中加入玉米淀粉并加热煮沸糊化，然后依次加入胰蛋白胨、大豆蛋白胨和碳酸钙并搅拌溶解，然后进行高温杀菌得到培养基。 

所述的搅拌溶解过程中不断补充纯水补足玉米淀粉蒸煮过程中失去的水分。 

所述的高温杀菌是指在121℃环境下灭菌20分钟。 

本发明涉及上述培养基的应用方法，通过将半胱氨酸和色氨酸溶解于人工海水中配成混合氨基酸溶液并采用过滤膜进行过滤，然后将所述培养基对发酵萎缩芽孢杆菌进行发酵培养，在发酵培养过程中添加过滤后的混合氨基酸溶液，实现萎缩芽孢杆菌产量的优化。 

所述的混合氨基酸溶液中含有半胱氨酸0.10g/L以及色氨酸0.02g/L。 

采用本发明方法成功的对萎缩芽孢杆菌产Bacillamide C的培养基成分进行了优化。在摇瓶水平上，将菌种分别接种到基本培养基和最优培养基中，比较两种培养基中菌种的生长情况和产Bacillamide C的情况。