[发明专利]利用神经内分泌因子基因选择山羊产羔性状的分子标记方法

权利要求书

1.一种利用神经内分泌因子基因选择山羊产羔性状的分子标记方法，其特征在于，包括下列步骤：

1）以山羊基因组DNA为模板，在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg²⁺、dNTPs存在的情况下，利用引物P1在PCR条件下进行扩增，筛查山羊Kisspeptin基因内含子2的碱基突变；

所述的引物P1如下：

上游引物1F：5′-CAGACCGCATTTCCACCTAT-3′；

下游引物1R：5'- TTCATCAGGCTCCTACTAGACC-3'；

所述的PCR扩增的条件是：12μL反应体系，包括0.25U Taq DNA聚合酶，6 μL 2×Buffer，0.4 μL 山羊基因组DNA样品，10 pmol/μL引物P1的上、下游引物各0.3μL和灭菌超纯水4.9 μL；

所述的PCR扩增反应程序如下：

利用引物P1的PCR反应程序为：95℃预变性5min，94℃变性30s，62.8℃退火40s，72℃延伸40s，共进行35个循环，最后72℃充分延伸10min，4℃保存；

2）根据琼脂糖凝胶电泳对引物P1的PCR扩增产物进行大小判定，发现引物P1扩增位点存在1个碱基的突变和8bp的碱基缺失；

3）采用10%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测引物P1扩增的PCR扩增产物，然后对引物P1的PCR扩增产物进行基因分型和基因频率分析，以及与关中奶山羊和西农萨能奶山羊的产羔性状之间进行关联分析，结果如下：

纯合型TT在2643bp位的碱基是T，杂合型TC在2643bp位的碱基是T/C，杂合型CC在2643bp位的碱基是T；杂合型TG在2677bp位缺失AGTTCCCC。