[发明专利]牛初乳及其制品中免疫球蛋白G半定量快速检测试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种免疫球蛋白G半定量快速检测试纸条及其制备方法。

背景技术

科学研究发现，奶牛的初乳最符合人体的需要，所含的各种生长素可调节人体免疫功能，并帮助骨骼、肌肉、神经、软骨关节的生长发育。随着我国乳业的迅速发展，奶牛存栏数不断增长，牛初乳产量持续增加，据统计2005年底我国奶牛存栏1100万头，按每头奶牛分娩后前3d所产初乳量43.5kg，以犊牛消耗11kg计，则每头母牛有32.5kg初乳剩余，按每年60％奶牛分娩产犊，则每年将有2.15万吨的牛初乳有待加工利用，可见牛初乳产量巨大。

近年来，牛初乳作为免疫型功能因子在食品和保健品中得到广泛应用，价格倍增，有的养牛户将营养成分和功能性组分大为降低的常乳作为初乳原料交售，鱼目混珠，以次充好，对初乳制品的质量造成不良影响，把好原料关日益收到消费者的关注，同时市售的初乳粉中IgG含量变化很大，同其产品所注明的含量存在很大差异，为了保证目前牛初乳制品健康发展，防止假冒初乳粉或其加工制品扰乱市场，有必要对研发一种对牛初乳及市售初乳产品进行快速含量测定的方法。

牛初乳中免疫球蛋白G(IgG)含量丰富，为常乳的200倍，为人类初乳的50倍，牛初乳中IgG含量与其它生物活性物质含量具有一定的正相关性，所以检测IgG含量是衡量牛初乳及其制品生物活性的最佳途径(张和平等在乳品工业期刊上发表的牛初乳中免疫球蛋白的测定.2001，29(2)：23-24；Jaction，2009)。现有牛初乳IgG检测方法：琼脂免疫单扩散法、琼脂免疫双扩散法、酶联免疫吸附法、高效液相色谱法等多种方法，但这些方法只适合于实验室内检测，操作程序繁琐，需要时间长，不适合于现场操作(熊勇华，许杨，魏华等在《食品工业科学》期刊上发表的HPIC法检测牛初乳中IgG含量；徐丽，生庆海.王玉良等在《中国乳品工业》刊登的牛初乳制品功能性成分的分析；丁连才等在《中国奶牛》上的牛初乳中活性物质IgG含量分析；蒋新月等在《中国乳品工业》上的检测牛初乳粉及其产品中IgG质量浓度的三种方法比较)。李忠秋等人在《中国奶牛》上2008年第3期发表的《免疫单扩散法检测牛初乳IgG含量方法改良及牛初乳样品的检测》中介绍了牛初乳及其制品中IgG含量检测方面已经开展过相关工作，改进了琼脂免疫单扩散法，使其准灵敏度和确性有所提高，还有刘春龙和李忠秋在吉林农业大学学报期刊上2006年第4期发表的《免疫胶体金法和免疫单扩散法检测牛初乳中IgG含量的比较研究》中介绍建立了相应免疫斑点金检测法，使得检测步骤有所简化，但仍不能满足现场检测的需要，尚未工厂化规模生产应用，因此，建立一种适合于现场快速、简单的检测方法非常必要。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有牛初乳及其制品中免疫球蛋白G的检测操作程序繁琐，检测所需时间长，不适合于现场操作的问题，本发明提供了一种牛初乳及其制品中免疫球蛋白G半定量快速检测试纸条及其制备方法。

本发明的牛初乳及其制品中免疫球蛋白G半定量快速检测试纸条，由聚氯乙烯材料(PVC)背衬、样品吸收垫、玻璃纤维、硝酸纤维素膜和吸水垫组成，在氯乙烯材料(PVC)背衬上依次连续粘附有样品吸收垫、玻璃纤维、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中玻璃纤维与硝酸纤维素膜有搭接，硝酸纤维素膜和吸水垫有搭接；所述玻璃纤维上包被有兔抗牛IgG-胶体金标记物；所述硝酸纤维素膜上包被有1～4条兔抗牛IgG构成的检测线和1条豚鼠抗兔IgG构成的质控线；其中每条检测线的兔抗牛IgG的包被量沿远离玻璃纤维的方向上依次增加。

本发明的牛初乳及其制品中免疫球蛋白G半定量快速检测试纸条的制备方法，是通过以下步骤实现的：一、采用柠檬酸三钠还原法制备得20nm胶体金，然后向20nm胶体金中加入兔抗牛IgG抗体制备得兔抗牛IgG-胶体金标记物，然后包被在玻璃纤维上；二、将兔抗牛IgG抗体包被在硝酸纤维素膜上构成检测线，再将豚鼠抗兔IgG抗体包被在硝酸纤维素膜上构成质控线，其中检测线的条数为1～4，检测线上兔抗牛IgG抗体的包被量依次增加；三、在氯乙烯材料(PVC)背衬上依次连续粘附上样品吸收垫、步骤一得到的玻璃纤维、步骤二得到的硝酸纤维素膜和吸水垫，其中玻璃纤维与硝酸纤维素膜有搭接，硝酸纤维素膜和吸水垫有搭接；其中控制检测线的兔抗牛IgG抗体的包被量沿远离玻璃纤维的方向上依次增加，得到牛初乳及其制品中免疫球蛋白G半定量快速检测试纸条。