[发明专利]检测尿中吗啡类生物碱的柱切换LC-MS/MS分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测尿中吗啡类生物碱的柱切换LC-MS/MS分析方法，具体涉及一种检测尿样中的吗啡、O⁶-单乙酰吗啡、可待因或乙酰可待因的柱切换LC-MS/MS分析方法。

背景技术

近年来随着国际毒潮持续泛滥，境外毒品对我国的侵袭日益加剧，吸食或注射海洛因的人员也越来越多。为了打击毒犯，维护正义，禁毒部门逐年加大对毒品案件的侦查力度。禁毒部门在侦破毒品案件时，为了定性检测吸毒嫌疑人体液中的毒品，常使用单抗免疫检测试剂盒，但是单抗免疫检测试剂盒容易受到某些药物的干扰出现假阳性，不能直接单独用作吸毒案件的定性依据，因此对这类人群体液中定性检验毒品，从而判断他们是否吸食毒品海洛因尤为重要。海洛因进入人体后，在体内代谢很快，几乎检测不到原体海洛因，而且海洛因在人体内很快代谢为吗啡和单乙酰吗啡，而吗啡属于水溶性药物，极性较大，应用气相色谱直接分析较为困难，而且灵敏度低。目前，气相色谱-质谱(GC-MS)分析尿中吗啡已有很多报道，但是对检材必须采用混合溶剂(氯仿∶异丙醇＝9∶1)提取、丙酸酐衍生化后用GC-MS进行定性分析，样品处理繁琐、难以满足实际案件快速检验的需要。

样品前处理是生物样品分析方法中一个非常重要的步骤，也是比较费时、工作量大的过程。柱切换技术，通过阀切换将处理试样与分析统一在一个系统中，不仅增加了样品处理的安全性，而且减少了人为因素影响，提高了准确度和精密度。液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)技术集液相色谱高效的在线分离能力与质谱的高灵敏度、高选择性于一体，正成为法医毒物分析强有力的工具。多反应监测(MRM)模式通过两次离子选择作用，锁定目标物的母离子-子离子对，大大提高了分析的专一性和灵敏度。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种检测尿中吗啡类生物碱的柱切换LC-MS/MS分析方法，通过仪器改装，将柱切换技术与LC-MS/MS联用，使得待测尿样无需前处理，可直接进样，大大简化了实验步骤，节约了分析时间，降低了成本，同时，本发明的柱切换LC-MS/MS分析方法快速、灵敏、可靠，可广泛应用于实际案例的分析。

本发明所述的柱切换LC-MS/MS分析方法，包括如下步骤：

1)配置双泵输液系统和高压流路选择阀系统

为了实现柱切换，本发明的分析方法至少需配置双泵输液系统和高压流路选择阀系统，所述系统具体包括十通切换阀1、四元梯度泵2、高压二元泵3、进样器4、预处理柱5、分析柱6和检测器7。其中，十通切换阀1的接口⑤与四元梯度泵2连接；十通切换阀1的接口⑩与高压二元泵3通过进样器4连接；十通切换阀1的接口④、⑨分别与预处理柱5的两端相连；分析柱6的一端与十通切换阀1的接口⑧相连，另一端与检测器7连接。

所述四元梯度泵2为Waters Alliance 2695泵，高压二元泵3为Waters1525泵，检测器7为Quattro Premier XE串联四极杆质谱。

所述的双泵输液系统和高压流路选择阀系统的具体流路过程如下：

a.初始状态I(参见图1)：四元梯度泵2输送分析流动相，依次通过十通切换阀1的接口⑤、⑥、⑦、⑧，进入分析柱6；高压二元泵3输送预处理流动相经过进样器4，通过十通切换阀1的接口⑩、⑨，流入预处理柱5，即当样品通过进样器4进样时，预处理流动相将样品带入预处理柱5，样品在预处理柱5上被净化和富集，废液通过十通切换阀1接口④、③排出；经过预处理时间后，十通切换阀1切换为进样状态II。

b.进样状态II(参见图2)：分析流动相通过十通切换阀1的接口⑤、④进入预处理柱5并把样品通过十通切换阀1的接口⑨、⑧，冲入分析柱6，并最终进入到检测器7中进行检测。

其中，在进样状态II情况下，高压二元泵3继续持续不断的输送预处理流动相，此时十通切换阀1通过接口⑩、①、②、③直接将预处理流动相排出；经过切换时间后，十通切换阀1切换成初始状态I，平衡准备下一次进样。

2)液相色谱条件

a.预处理柱型号：HLB 25μm 2.1×20mm(Waters公司)

预处理柱柱温：室温

预处理流动相：水

流速：1.0mL·min^-1

预处理时间：36s

切换时间：36s-3.00min

b.分析柱型号：MS C18 3.5μm 2.1mm×150mm(Waters公司)

分析柱柱温：35℃