[发明专利]一种鸡肉质相关基因IGFBP-1及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程和遗传育种领域，具体涉及一种鸡肉质相关基因IGFBP-1及其应用。 

背景技术

我国具有丰富的优质肉鸡资源，然而同一品种的肉鸡在不同个体间也有很明显的差异。将分子标记的现代育种技术应用于优质肉鸡的选育将会有效提高选种效率。 

肌肉的发生受多种因素影响，包括成肌细胞的发生、迁移、增生、分化、肌管形成，在这一系列的过程中，多个基因家族发挥重要的生物学作用，其中包括胰岛素样生长因子（Insulin-like growth factor，IGF）系统。 

IGF系统包括IGF-1、IGF-2，IGFBP-1至IGFBP-7，以及一系列的IGFBP相关基因，在肌细胞的发生、分化、肌纤维的形成过程中发挥重要的调节作用。IGFBP生物学发挥最主要的方式是通过与IGF结合，阻碍IGF与其受体的结合，从而阻碍IGF生物学功能的发挥，因此与IGF作用相反。 

迄今为止，尚无有关鸡IGFBP-1基因作为鸡肉质性状的分子标记。 

发明内容

本发明的目的在于根据现有的鸡肉质品种筛选中存在的不足，提供一种鸡肉质相关基因IGFBP-1。 

本发明还有一个目的在于提供上述鸡肉质相关基因IGFBP-1的应用。 

本发明上述目的通过以下技术方案予以实现： 

一种鸡肉质相关基因IGFBP-1，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，该序列中第286bp处有1个ATA三碱基的插入缺失突变。

其中用于扩增所述基因IGFBP-1和检测序列表SEQ NO:1的第286处ATA/-碱基掺入缺失的正反向引物的DNA序列如SEQ ID NO:2~3所示。 

本发明鸡肉质相关基因IGFBP-1的应用具体步骤如下： 

（1）对待选育鸡进行静脉采血提取总DNA；

（2）根据报道的鸡IGFPB-1基因序列（Ensembl:ENSGALG00000012437）利用生物学引物设计软件Primer5.0设计软件，经Oligo软件检测，确定引物，引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成，序列由SEQ ID NO:2~3所示；

（3）将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据产物大小判定结果。

作为一种优选方案，步骤（2）中所述PCR反应扩增程序为： 

作为一种优选方案，步骤（3）中用2.0%含EB琼脂糖凝胶电泳对PCR扩增产品进行检测，所述电泳条件为电压100V，时间为20min，在凝胶成像系统中观察条带，并进行回收和纯化，并测序，发现存在 位插入缺失变异。

取16 μL PCR扩增产物，加入10U SspⅠ限制性内切酶和2 μL 10×酶切缓冲液，加水至20μL； 

反应完成后，用2.5%琼脂糖凝胶电泳，电泳条件为电压100V，时间为30min，在凝胶成像系统中观察条带，根据产物的大小判定结果。

使用PCR扩增得到含有ATA插入缺失变异的IGFBP-1基因626bp，因为插入型个体含有一个SspⅠ-RFLP多态性。 

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果： 

本标记为鸡肉质性状的选育提供了一种新的分子标记。实验证明IGFBP-1基因对鸡的肌肉剪切力和肌纤维横截面积的有一定的影响，可以做为候选基因或鸡肉质性能的的遗传标记。

附图说明

图1是本发明的技术流程图； 

图2是用鸡血液总DNA扩增IGFBP-1基因626bp的片段，琼脂糖检测电泳图。琼脂糖凝胶浓度为2.0%。图中泳道从左至又分别为DNA分子量标记（50-2000bp）、样本1、杨本2、样本3；

图3为IGFBP-1基因626bp测序结果图，上面为ATA插入型，下面为缺失型；

图4为IGFBP-1基因PCR产物经过SspⅠ酶切，基因分型电泳图。图中泳道从左到右分别为DNA分子量标记（50-2000bp）、DD基因型个体、II基因型个体及ID基因型个体。

具体实施方式

以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。

实施例1 

1、鸡血样的采集和DNA的提取：