[发明专利]应用生物反应器工业化生产动物狂犬病疫苗的方法

权利要求书

1.应用生物反应器工业化生产动物狂犬病疫苗的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将微载体和生物反应器经灭菌后，加入细胞生长液，接种Vero细胞进行培养，待微载体上的细胞形成致密的单层，接种狂犬病病毒，并继续培养；(2)接毒后18h，连续收获病毒液；(3)将上述收获的用30万截留分子量的超滤膜包浓缩10～50倍，按灭活剂与浓缩病毒液的体积比为1∶2000加入质量浓度为37％甲醛溶液进行灭活后，再经过凝胶层析柱Sepharose 4FF柱层析得到纯化病毒液；(4)将纯化病毒液按病毒液和稳定剂7∶1体积比加入稳定剂配制成成品疫苗，所述的稳定剂为：将蔗糖40g、胰蛋白胨8g、甘露醇32g加入双蒸馏水中，并加双蒸馏水至100ml。

2.根据权利要求1所述的应用生物反应器工业化生产动物狂犬病疫苗的方法，其特征在于：所述的生物反应器设定参数为：pH 6.5～7.8、温度33～37℃、溶氧30～80％、搅拌速度30～100rpm。

3.根据权利要求1所述的应用生物反应器工业化生产动物狂犬病疫苗的方法，其特征在于：病毒的接种量为0.0001～0.1MOI。

4.根据权利要求1所述的应用生物反应器工业化生产动物狂犬病疫苗的方法，其特征在于：所述的生物反应器容积为14～150L；或，制苗用细胞经过14L～40L或14L～40L～150L逐级放大培养后，于40L或150L生物反应器培养狂犬病毒；或，直接用14L、40L或150L的生物反应器培养病毒。

5.根据权利要求1～4之一所述的应用生物反应器工业化生产动物狂犬病疫苗的方法，其特征在于：所述的微载体为Cytodex系列微载体，微载体的使用密度为2～25g/L。

6.根据权利要求1～4之一所述的应用生物反应器工业化生产动物狂犬病疫苗的方法，其特征在于：所述的生物反应器为搅拌式生物反应器。

7.根据权利要求1～4之一所述的应用生物反应器工业化生产动物狂犬病疫苗的方法，其特征在于：所述的生物反应器的培养采用批式、流加或灌注培养的方式，灌注的速率根据细胞的密度为每天0.5～4个工作体积。