[发明专利]应用生物反应器工业化生产动物流感疫苗的方法无效
申请号: | 201010282155.0 | 申请日: | 2010-09-15 |
公开(公告)号: | CN102133398A | 公开(公告)日: | 2011-07-27 |
发明(设计)人: | 李晶梅;刘汉平;秦红刚;温文生;漆世华;李伟;彭杏;靖志强 | 申请(专利权)人: | 武汉中博生物股份有限公司 |
主分类号: | A61K39/145 | 分类号: | A61K39/145;C12N7/00;A61P31/16;C12R1/93 |
代理公司: | 武汉开元知识产权代理有限公司 42104 | 代理人: | 唐正玉 |
地址: | 430070 湖北省*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 应用 生物反应器 工业化 生产 动物 流感疫苗 方法 | ||
1.应用生物反应器工业化生产动物流感疫苗的方法,其特征在于包括如下步骤:(1)将搅拌式生物反应器和Cytodex系列微载体经灭菌后,加入细胞生长液,接种Vero或MDCK细胞培养;待微载体上的Vero或MDCK细胞形成致密的单层,接种流感病毒,并继续培养扩增病毒;(2)待细胞病变达到80%以上时,收获病毒液;(3)将上述收获的病毒液用100KD或300KD截留分子量的超滤膜包浓缩10~50倍,按灭活剂与病毒滤液的体积比为1∶4000的加入β-丙内酯或按灭活剂与病毒滤液的体积比为1∶1000的质量浓度为37%甲醛溶液进行灭活后,再按佐剂与灭活的病毒液的体积比1∶2加入纳米铝佐剂,配制成流感灭活疫苗。
2.根据权利要求1所述的应用生物反应器工业化生产动物流感疫苗的方法,其特征在于:所述的细胞接毒后在无血清培养基中培养,同时,在培养基添加浓度1~8μg/ml的胰酶。
3.根据权利要求1所述的应用生物反应器工业化生产动物流感疫苗的方法,其特征在于:所述微载体的使用浓度为2g/L~25g/L。
4.根据权利要求1所述的应用生物反应器工业化生产动物流感疫苗的方法,其特征在于:流感病毒接种量为0.1~0.0001MOI。
5.根据权利要求1~4之一所述的应用生物反应器工业化生产动物流感疫苗的方法,其特征在于:所述流感病毒为禽流感病毒或猪流感病毒。
6.根据权利要求1~4之一所述的应用生物反应器工业化生产动物流感疫苗的方法,其特征在于:所述的搅拌式生物反应器容积为14L~150L,制苗用细胞经过14L~40L~150L逐级放大培养后,于150L生物反应器培养流感病毒;或直接用14L、40L或150L的搅拌式生物反应器培养病毒。
7.根据权利要求1-4之一所述的应用生物反应器工业化生产动物流感疫苗的方法,其特征在于:搅拌式生物反应器的培养采用批式、流加或灌注培养的方式,灌注的速率根据细胞的密度为0.5~4个工作体积/天。
8.根据权利要求1-4之一所述的应用生物反应器工业化生产动物流感疫苗的方法,其特征在于:所述的搅拌式生物反应器设定参数为:pH6.5~7.6、温度33~37℃、溶氧30~80%、搅拌速度40~100rpm。
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