[发明专利]毛白杨中的MYB类转录因子PtrMYB01及其cDNA的克隆方法及应用

权利要求书

1.一种来源于毛白杨的MYB类转录因子PtrMYB01，其特征在于：其具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

2.一种能编码转录因子PtrMYB01的基因，该基因具有SEQ ID NO.1所示的序列。

3.一种表达载体，包含权利要求2所述的基因。

4.权利要求2所述的基因在大田或森林中增加植物抗逆性方面的应用。

5.权利要求1所述毛白杨MYB类转录因子PtrMYB01的克隆方法，包括如下步骤：

(1)从毛白杨中提取总RNA，然后反转录合成cDNA；

(2)根据PtrMYB01转录因子的保守序列设计特异性引物：

Fdtsd：5-ATGGGCAGACCACCTTGCTG-3

Rdtsd：5-GAGCCCTCCCACTAGAAGAG-3

(3)通过链式聚合酶反应扩增到一个DNA片段；

(4)将扩增产物纯化，取纯化物克隆到pCXSN载体，转化DH5α细胞。

6.如权利要求5所述毛白杨MYB类转录因子PtrMYB01的克隆方法，其特征在于：所述步骤1中反转录合成cDNA是第一链合成cDNA，取4μg总RNA和1μl 0.5μg/μl的Oligo(dT)₁₈primer，小心混匀，70℃保温5分钟，立即浸入冰水中；按次序分别加入下列试剂：

5μl 5×M-MLV RT Buffer

2μl dNTP mix 2.5mM

1μl RNase抑制剂30U/μl

1μl M-MLV Reverse Transcriptase

然后加DEPC水到25μl，混匀，室温离心5秒，将所有溶液收集到管底，37℃保温1小时，再90℃处理5分钟，冰上冷却。

7.如权利要求5所述毛白杨MYB类转录因子PtrMYB01的克隆方法，其特征在于：所述链式聚合酶反应试剂与反应条件如下：

首先将下列试剂混在一起：

ddH₂O               18.25μl

10×PCR buffer      2.5μl

MgCl₂               1.5μl

dNTP                0.5μl

10μmol.L^-1FSD      0.5μl

10μmol.L^-1RSD          0.5μl

cDNA                    1μl

Pfu酶                   0.25μl

总体积                  25μl

链式聚合酶反应条件为：首先94℃变性3min，然后进入下列循环：94℃30sec，55℃30sec，72℃1min，共进行34个循环，最后72℃延伸10min。