[发明专利]一种以木薯淀粉原料生产微生物油脂的补料分批发酵工艺

权利要求书

1.一种以木薯淀粉原料生产微生物油脂的补料分批发酵工艺，其特征在于：在菌体对数生长期同时向发酵培养基中补加碳源和氮源，当菌体处于稳定期时向发酵培养基中补加碳源。本发明的优点在于延长了菌体的生长期使其生物量显著提高，在菌体处于稳定期时只提供碳源使其大量合成油脂，且本发明所设计的补料工艺可使发酵过程中发酵培养基的pH保持稳定。其工艺包括以下步骤：

A.将斜面上的菌种转接至种子培养基中进行种子培养；

B.将步骤A中获得的种子接种于发酵培养基中进行补料分批式发酵培养，在发酵过程中菌体对数生长期以C/N为15-40同时向发酵培养基中补加碳源和氮源，当菌体处于稳定期时只向发酵培养基中补加碳源；

C.将步骤B中获得的菌体烘干至恒重，提取微生物油脂进行称量和成分测定。

2.按照权利要求1所述的以木薯淀粉原料生产微生物油脂的补料分批发酵工艺，其特征在于：发酵菌种为皮状丝孢酵母、发酵性丝孢酵母、粘红酵母、橙黄红酵母、斯达凯依酵母、被孢霉、拉曼被孢霉、少根根霉等可生产微生物油脂的菌种，优先选用本实验室经诱变选育而得的皮状丝孢酵母B3，保藏编号为CCTCC NO.M 2010076。

3.按照权利要求1所述的以木薯淀粉原料生产微生物油脂的补料分批发酵工艺，其特征在于：发酵培养基采用木薯淀粉水解糖化液作为碳源，采用酵母提取物、蛋白胨、NH₄NO₃、(NH₄)₂SO₄等作为氮源。

4.按照权利要求1所述的以木薯淀粉原料生产微生物油脂的补料分批发酵工艺，其特征在于：将保存在固体培养基上的皮状丝孢酵母、发酵性丝孢酵母、粘红酵母、橙黄红酵母、斯达凯依酵母、被孢霉、拉曼被孢霉、少根根霉等可生产微生物油脂的菌种接入种子培养基中培养36-48h，以3％-10％的接种量接入发酵培养基；摇瓶培养的温度为25-30℃，摇床转速为180-220r/min；发酵罐培养pH保持在5.5-6.5，通气量0.5-1.5vvm，搅拌速度200-600r/min。

5.按照权利要求1所述的以木薯淀粉原料生产微生物油脂的补料分批发酵工艺，其特征在于：发酵培养至菌体处于对数生长期、还原糖浓度低于15g/L时进行补料，向发酵培养基中补加200-400g/L的木薯淀粉水解糖化液碳源，使还原糖浓度维持在30-60g/L，并以C/N为15-40同时向发酵培养基中补加酵母提取物氮源；发酵培养至菌体处于减速期，停止补加氮源，继续向发酵培养基中补加200-400g/L的木薯淀粉水解糖化液碳源，使还原糖浓度维持在30-60g/L。

6.按照权利要求1所述的以木薯淀粉原料生产微生物油脂的补料分批发酵工艺，其特征在于：发酵60-100h结束，3000-5000r/min离心菌体，水洗1-2次，50-100℃烘干至恒重。

7.按照权利要求1所述的以木薯淀粉原料生产微生物油脂的补料分批发酵工艺，其特征在于：油脂的提取方法为索氏抽提法、超临界CO₂萃取法、酸热法和有机溶剂法。

8.按照权利要求1所述的以木薯淀粉原料生产微生物油脂的补料分批发酵工艺，其特征在于：发酵过程中通过向发酵培养基中补加碳源和氮源，可以使发酵培养基的pH值保持在5.5-6.5，而不需要额外补加酸碱来调节发酵培养基的pH。