[发明专利]检测母猪总产仔数性状相关突变等位基因的方法及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测母猪总产仔数相关突变等位基因的方法及其专用试剂盒。

背景技术

繁殖力是影响养猪业的一个重要的经济性状，繁殖力的提高无疑将给养猪业生产带来巨大的经济效益，但是如何提高猪繁殖力的育种效率一直是备受关注的问题。猪的育种主要分为常规育种和分子育种两方面，在传统育种中，选择的依据通常是表现型而非基因型，这是因为人们无法直接知道个体的基因型，只能从表现型加以推断。由于数量性状的表现型与基因型之间缺乏明确的对应关系，使得选择效率不高。要提高选择的效率，最理想的方法应是能够直接对基因型进行选择。分子标记的基因型是可以识别的，为实现对基因型的直接选择提供了可能，这也是分子标记在育种中应用的最主要方面。目前，利用目标性状与标记基因型之间的关联性进行标记辅助选择是目前研究的重点之一。

红细胞生成素受体(Erythropoietin Receptor，EPOR)是哺乳动物红细胞发育过程中最有效且最主要的调节激素受体，它通过与红细胞生成素(EPO)相结合，在红系祖细胞的存活、增殖及分化过程中起调节作用。美国学者Vallet等(2001，2006)研究发现，EPOR基因第4内含子T等位基因与提高子宫存量显著相关(P＜0.01)。一般来说，子宫存量与产仔数是正相关的，EPOR基因已经成为一个可影响母猪总产仔数的主效候选基因，具有很大的研究价值。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测母猪总产仔数相关突变等位基因的方法。

本发明的另一个目的是提供一种检测母猪总产仔数相关突变等位基因的专用试剂盒。

本发明还一个目的是提供一种用于检测母猪总产仔数性状的引物对，包括由序列表中序列1所示的核苷酸和序列表中序列2所示的核苷酸组成。

本发明的再一个目的是公开了含有引物对的试剂盒在制备猪的育种方面的应用，特别是在制备高总产仔数性状猪方面的应用。

为实现上述目的本发明提供如下的技术方案：

一种检测母猪总产仔数相关突变等位基因的方法，其特征在于它是以检测待测母猪GenBank Accession Number EU407778的第2348位脱氧核糖核苷酸是T还是C，确定待测母猪的基因型是TT还是CC，TT基因型的母猪的产仔数高于CC基因型的母猪的产仔数；所述TT基因型为GenBank Accession Number EU407778的自5′末端第2348位脱氧核糖核苷酸为T的纯合体；所述CC基因型为GenBank Accession Number EU407778的自5′末端第2348位脱氧核糖核苷酸为C的纯合体。

本发明所述确定待测母猪GenBank Accession Number EU407778的自5′末端第2348位脱氧核糖核苷酸是T还是C的方法可采用测序分析、PCR-SSCP法等。

其中测序分析包括PCR扩增和对PCR扩增产物进行测序的步骤；所述PCR扩增用的引物对为：以猪的基因组DNA为模板进行PCR扩增的产物含有GenBank AccessionNumber EU407778的自5′末端第2348位脱氧核糖核苷酸。

所述PCR扩增所用的引物对具体可为由序列表的序列1所示的核苷酸和序列表的序列2所示的核苷酸组成的引物对。

即上游引物：5’-ACTACCCCCTTGTCCCAAAC-3’；

下游引物：5’-GGACCAA GCCAATCAGAGAA-3’。

当采用所述引物对进行PCR扩增时，根据待测猪的基因组DNA的不同，扩增得到的DNA片段为序列3所示的核苷酸序列或序列4所示的核苷酸序列。

所述确定待测母猪的GenBank Accession Number EU407778的自5′末端第2348位脱氧核糖核苷酸是T还是C的方法也可以是PCR-SSCP法。

本发明进一步公开了一种检测母猪总产仔数相关突变等位基因的试剂盒，它是由序列表中序列1所示的核苷酸和序列表中序列2所示的核苷酸组成的引物对及S1、S2、S3三种标准品组成。

本发明所述试剂盒的制备方法，是将引物对，S1、S2和S3在同一聚丙烯酰胺凝胶中，同时电泳得到的TT基因型标准品、CC基因型标准品和TC基因型标准品。

同时电泳三个标准品及以本试剂盒所提供引物扩增需检测猪所得的PCR产物，例如图1，可清晰、准确、快捷的判别所检猪基因型。