[发明专利]一种湿地嗜油产碱杆菌的基因及其应用

权利要求书

1.一种湿地嗜油产碱杆菌的基因，其特征在于该基因具有下列核苷酸序列之一：

1)具有SEQ ID NO：1所示的碱基序列；

2)与SEQ ID NO：1所限定的核酸序列具有95％以上的同源性，且编码相同生物学功能蛋白质的DNA序列。

2.一种根据权利要求1所述的湿地嗜油产碱杆菌的基因编码的蛋白，其特征在于该蛋白具有下列氨基酸序列之一：

1)具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；

2)通过将SEQ ID NO：2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加而产生的衍生蛋白质的氨基酸序列，该衍生蛋白质与SEQ ID NO：2的蛋白具有相同的生物学功能。

3.一种重组载体，其特征在于该重组载体含有权利要求1所述的湿地嗜油产碱杆菌的基因。

4.一种宿主细胞，其特征在于该宿主细胞含有权利要求3所述的重组载体。

5.权利要求1所述的一种湿地嗜油产碱杆菌的基因在降解废水、污泥中的油污中的应用。

6.一种克隆根据权利要求1所述的一种湿地产碱杆菌的基因的方法，其特征在于该方法的具体步骤为：

a.从油污湿地筛选的湿地产碱杆菌菌株的菌落中提取该细菌的核16S rDNA基因；

b.对上述提取的16S rDNA基因进行PCR扩增，采用了如下的扩增条件和扩增的引物：

PCR扩增条件为：98℃预变性5min，95℃变性35s，55℃退火35s，72℃延伸1min 30s，35个循环，72℃延伸8min；

PCR扩增的引物是：

P1正向引物为：5’AGAGTTTGATCCTGGCTCAG 3’；

P2反向引物为：5’GGTTACCTTGTTACGACTT；

c.PCR产物的回收；

d.采用SK2211-T-载体PCR产物克隆目的片断TA克隆。

e.连接产物转化；

f.蓝白斑筛选；

g.质粒提取，最终得到湿地产碱杆菌的基因全序列。