[发明专利]利用APOA5多态预测血浆甘油三酯水平的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种血浆甘油三酯水平的预测方法，特别是涉及一种利用载脂蛋白A5(apolipoprotein A5，APOA5)基因中的SNP(single nucleotide polymorphism，SNP，单核苷酸多态性)位点预测血浆甘油三酯水平的方法。

背景技术

血脂异常，尤其是甘油三酯(triglyceride，TG)水平升高是冠心病发病的主要风险因素之一。由于冠心病是长期累积的疾病，一旦出现心梗就很难再逆转，给人们的生活和社会经济都造成重大的负担，因此，如何在早期出现冠心病高危因素的时候就进行有效的发现和防控病程发展，就成为重要课题。

目前随着我国社会经济快速发展，人们膳食结构、生活方式都有了巨大的变化，我国人群血脂水平和血脂异常检出率明显增高。通过大规模流行病学研究已经表明了血浆甘油三酯(triglyceride，TG)水平升高是冠心病的独立危险因素。根据2005年卫生部报告我国高甘油三酯血症患病率为11.9％，其中，男性为14.5％，女性为9.9％；城市人群为14.2％，农村为10.9％。引起高甘油三酯血症的因素有很多，除继发性高甘油三酯血症外，脂蛋白脂肪酶(lipoproteinlipase，LPL)及其辅助因子载脂蛋白CII的基因突变或缺陷也会导致严重的高甘油三酯血症，但实际上只有一小部分的原发性严重高甘油三酯血症患者带有这些基因的异常。

2001年，一个新的载脂蛋白家族成员，载脂蛋白A5(APOA5)在人和鼠的比较基因组研究中被发现。动物实验和大量人群研究均提示，载脂蛋白A5参与体内TG的代谢，是血浆TG水平的重要决定因子，与高甘油三酯血症密切相关。APOA5敲除和转基因小鼠模型显示与血清甘油三酯水平呈负相关。由此，载脂蛋白A5作为一个新的高甘油三酯血症候选基因而为人们所关注。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种利用APOA5多态预测血浆甘油三酯水平的方法。该方法利用APOA5基因中的一个SNP位点rs2266788的基因型分型，实现检测个体APOA5基因的活性高低，以及由此引发的对个体血浆甘油三酯水平高低和冠心病罹患风险的预测。

为解决上述技术问题，本发明的利用APOA5多态预测血浆甘油三酯水平的方法，包括步骤：

(1)抽提检测对象的DNA样本，该样本可为血液DNA样本，如该DNA样本来源于外周血，但不限于外周血；

(2)将模板DNA进行PCR扩增，并将PCR产物纯化；

(3)纯化后的PCR产物进行DNA测序，确定APOA5基因中的SNP位点rs2266788的基因型分型；

(4)根据SNP位点的基因型，判断血浆甘油三酯水平。

所述步骤(2)中的PCR扩增的引物是上游：GACAGGGAGGCCACCAAAG(SEQ ID NO.1所示)，下游：GCAAAGCCTGGTGAATGTAATG(SEQ ID NO.2所示)。

所述步骤(3)中的SNP位点是SEQ ID NO.3所示的第407位碱基，该碱基基因型分为等位基因型C或等位基因型T；

所述步骤(4)中的判断标准是如果带有等位基因型C，则判断个体APOA5基因表达量及活性降低，个体血浆甘油三酯水平增高，个体罹患甘油三酯高脂血症和冠心病的风险增加，因此，根据基因型判断，风险增加程度基因型CC＞CT＞TT。

本发明有效地通过一个SNP位点分型，检测出APOA5基因的活性高低，为预测及判断个体血浆甘油三酯水平情况、甘油三酯高脂血症及由此引发的冠心病患病风险提供依据。

具体实施方式

实施例1SNP位点与人群甘油三酯水平的相关性

通过对大量冠心病关联研究的数据进行了整理和深度挖掘中发现APOA5中多态位点rs2266788与人群甘油三酯水平存在显著的相关性，具体参见以下实验结果。

一、人群样品的PCR直接测序研究

基于上述相关性，进行了基因水平、转录水平以及细胞水平的大量、深入研究，其中，PCR直接测序研究的实验步骤如下：

(1)外周血DNA样本抽提