[发明专利]一种减毒活疫苗及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种疫苗，尤其涉及一种减毒活疫苗及其应用。

背景技术

肠出血性大肠杆菌(enterohermorrhangic E.coli，EHEC)O 157:H7(EHECO157)是一种重要的人畜共患传染病病原，其感染已成为全球性的公共卫生问题。自1982年该菌首次被确认为严重致病菌以来，全球很多国家和地区包括中国都多次爆发流行。EHEC O157感染宿主可导致腹泻、出血性肠炎、溶血尿毒综合症等疾病和严重并发症。由于抗生素治疗可加剧感染病情的危险，目前尚无有效的预防和控制措施。EHEC O157菌培养容易、感染力强、传播途径多样，使其极有可能作为未来军事斗争的细菌武器和生物恐怖战剂，EHEC O157菌的烈性致病因子还有可能用于基因武器的构建。美国疾病控制中心已将其列为B类生物恐怖病原体严加防范。因此，无论从公共卫生还是生物反恐的需要出发，研制EHEC O157疫苗，加强其防控研究具有重大的战略意义。

EHEC O157引起宿主严重的感染性疾病主要通过三个方面来实现的。1)志贺毒素(shiga toxin，Stx)：志贺毒素在细胞表面受体结合介导下进入细胞，抑制细胞蛋白质的合成，最终导致组织严重病理损伤，引发感染性疾病；2)EHECO157通过表面抗原和炎症刺激因子(OmpA、intimin等)的作用，诱导肠道感染部位剧烈炎症反应，导致电解质平衡紊乱；3)粘附与擦拭损伤(Attaching andeffacing lesions，A/E lesions)：细菌紧密粘附于肠上皮细胞表面，通过一系列信号转导蛋白的相互作用(intimin-Tir，Tir-Cortactin，TCCP-N-WASP等)，引起细菌粘附部位肌动蛋白的聚集，导致微绒毛破坏、刷状缘损伤等肠上皮细胞特征性病例改变，细胞屏障功能破坏，引发感染性疾病。

OmpA、Intimin和Stx2B为肠出血性大肠杆菌O157:H7的重要致病因子，同时也是细菌的保护性抗原，目前已经有证据表明体内的抗OmpA(Torres AG，Kaper JB et al.Infect Immun 2003 Sep；71(9)：4985-95.)、抗intimin(Gu，J.，Y.Liu，etal._Microbes Infect 2009 11(10-11)：835-841)和抗Stx2B(Ma，Y.，X.Mao，et al.Immunol Lett 2008121(2)：110-115.)的抗体能够保护致死剂量的肠出血性大肠杆菌O157:H7的感染。

发明内容

本发明的目的在于提供一种减毒活疫苗，其保藏号为：CCTCC M 2010185。

所述减毒活疫苗，包含肠出血性大肠杆菌O157:H7的抗原。

所述抗原具有抗原OmpA、Intimin和Stx2B。

减毒活疫苗在制备预防肠出血性大肠杆菌O157:H7感染的制剂中的应用。

所述应用中的减毒活疫苗诱导产生保护性的抗OmpA、Intimin和Stx2B的抗体。

EHEC O157菌本身培养方便，经济。在经保藏号为CCTCC M 2010185的减毒活疫苗免疫的小鼠血清中检测到明显的抗肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株的抗体，且小鼠经过强毒株攻毒时具有一定的保护性。

本发明所述的减毒活疫苗菌株制备方便，本身带有肠出血性大肠杆菌O157:H7的全部抗原，能够刺激系统性抗肠出血性大肠杆菌O157:H7免疫反应，具有较好的保护性效果。

本发明所述的减毒活疫苗已于2010年7月23日保藏，其保藏号为CCTCCNO：M2010185；保藏单位：中国典型培养物保藏中心；地址：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学；分类命名：肠出血性大肠杆菌EHECO157:H700B015(Enterohemorrhagic Escherichia coli EHEC O157:H700B015)。

具体实施方式

下面提供的实施例用于进一步阐明本发明，而不构成对本发明范围的限制。

实施例1 肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株00B015(保藏号为CCTCC M 2010185)刺激的免疫反应

1实验方法

1)肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株00B015的分离鉴定：