[发明专利]一种制备一枝蒿酮酸的方法

说明书

技术领域：

本发明属于一枝蒿酮酸的提取纯化技术领域，涉及一种采用超临界流体萃取和柱层析富集纯化技术提取制备高纯度一枝蒿酮酸的方法。

背景技术：

一枝蒿为菊科植物岩蒿Artemisia rupestris L.的全草，又名新疆一枝蒿、鹿角蒿。产于新疆维吾尔自治区境内的天山及阿尔泰山山脉，是维吾尔族常用药物，具有祛风解表，健胃消积，活血解毒的功效，主治风寒感冒，食积，跌打瘀肿。毒蛇咬伤，荨麻疹。现代药理研究表明，其具有抑制平滑肌收缩、抗肿瘤、消除自由及作用、抗过敏反应以及保肝作用。已有以新疆一枝蒿为主要成分的复方药品用于临床(如由新疆西域药业有限公司开发的复方一枝蒿颗粒，批准文号：国药准字Z20026711，临床上用于解表祛风、凉血解毒以及用于治疗病毒性感冒、咽喉肿痛等疾病)。一枝蒿中主要含有挥发油、倍半萜类、苷类、黄酮类、生物碱、多糖、氨基酸以及多肽类等化合物。其中一枝蒿酮酸(Rupestonic acid)是从一枝蒿中分离出的一种含多官能团的单体倍半萜，在一枝蒿中含量较高，可作为指标性成分用于对一枝蒿药材及其相关制剂的质量控制。中国专利申请号200410084818.2采用乙型肝炎病毒DNA克隆转染的人肝癌细胞(Hep-G2)的2.2.15系，观察所试药物一枝蒿酮酸再不同浓度下对2.2.15细胞分泌HbsAg、HbeAg和HBV-DNA的影响，结果显示：在三批实验中一枝蒿酮酸所试的4个剂量对2.2.15细胞分泌HbsAg均有明显的抑制作用，与对照组比较有显著性差异(P＜0.01)；并通过动物实验灌胃给药80、160、320mg/kg，qd，5-7d，明显降低CCL₁致肝损伤小鼠的血清GPT和GOT的含量，显著降低D-氨基半乳糖氨盐酸盐致急性肝损伤小鼠的血清GPT、GOT及ALP含量，并能降低小鼠免疫性肝损伤小鼠的血清GPT的含量。

一枝蒿酮酸的结构式如下：

中国专利(申请号200810072934.0)“利用高速逆流色谱法纯化一枝蒿酮酸和金腰素乙的方法”，采用正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水组成的混合溶剂作为高速逆流色谱分离溶剂系统，该方法需要大量的有害化学溶剂，不仅浪费宝贵的能源，而且造成比较严重的环境污染，不可避免地存在溶剂残留。中国专利(申请号200410084818.2)“一枝蒿酮酸的制备方法及用途”，采用硅胶柱层析与半制备高效液相色谱法纯化收集一枝蒿酮酸，得到无色棒状结晶，用于制备乙型肝炎病毒的抑制和保肝作用的药物。该方法制备量较小，成本高。但目前尚未见用超临界流体萃取一枝蒿酮酸的报道。因此本文采用超临界流体萃取和柱层析结合的方法制备一枝蒿酮酸，该方法运行成本低、绿色环保。

超临界流体(SF)是指超临界温度(Tc)和临界压力(Pc)状态下的高密度流体。超临界流体具有气体和液体的双重特性，其粘度与气体相似，但扩散系数比液体大得多，其密度和液体相近。超临界流体对物质进行溶解和分离的过程就叫超临界流体萃取(SFE)，其基本原理为：CO₂的Tc和Pc分别为31.05℃和7.38MPa，当处于这个临界点以上时，此时的CO₂同时具有气体和液体双重特性。它既近似于气体，粘度与气体相近，又近似于液体，密度与液体相近，但其扩散系数却比液体大的多。是一个优良的溶剂，能通过分子间的相互作用和扩散作用将许多物质溶解。同时，在稍高于临界点的区域内，压力稍有变化，即引起其密度的很大变化，从而引起溶解度的较大变化。因此，超临界CO₂可以从基体中将物质溶解出来，形成超临界CO₂负载相，然后降低载气的压力或升高温度，超临界CO₂的溶解度降低，这些物质就沉淀出来(解析)与CO₂分离，从而达到提取分离的目的。总而言之，超临界流体萃取技术是利用处于超临界状态的二氧化碳流体的良好溶解性能和较大的扩散系数对待分离物质进行提取分离纯化，具有环保、经济、无溶剂残留等优点。可以通过改变萃取的条件和技术提高超临界状态二氧化碳的萃取性能。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题是针对上述提取工艺的不足，提供一种超临界二氧化碳萃取一枝蒿酮酸的方法。该方法具有低能耗、萃取条件温和、绿色环保等优点，并且该方法得到的一枝蒿酮酸纯度高，质量好，杂质少。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种制备一枝蒿酮酸的方法，包括如下步骤：

(1)以干燥的一枝蒿为原料，经酸醇浸润、微波提取、压滤，浓缩干燥得干燥物；