[发明专利]艾滋病病毒靶细胞CD4+T细胞抵抗和清除HIV-1的特异表达miRNA群

说明书

技术领域：

本发明涉及艾滋病病毒靶细胞CD4+T细胞抵抗和清除HIV-1的特异表达miRNA群。具体的讲是在人microRNA组范围内筛选艾滋病相关miRNA，利用细胞模型和基因芯片技术相结合的方法建立的艾滋病病毒靶细胞CD4+T细胞抵抗和清除HIV-1的特异表达miRNA群，属生物医学领域。

技术背景：

microRNA(miRNA)是新近发现的一类约有18-24个核苷酸的内源性非编码小分子单链RNA，通过不完全互补的方式与编码蛋白mRNA的3’端非编码区结合，引起靶mRNA的降解、活性降低或翻译受抑，从而在转录后水平对基因表达进行调控。miRNA在细胞的个体发育、增殖、凋亡、分化和应激中扮演着重要的角色，与肿瘤、心脏病、糖尿病和艾滋病等多种疾病都有着密切联系，某些miRNA的产生过程与HIV-1(human immunodeficiency virus-type 1，人类免疫缺陷病毒)的生活周期相关联。因此推测在艾滋病的发生过程中，存在特征性的miRNA表达谱。

HIV-1天然的靶细胞CD4+T细胞的活化和增殖是HIV-1得以大量繁殖和广泛播散的先决条件，1996年Levine等人意外发现，经同时包被在磁珠上的CD3、CD28抗体(“CD3/CD28 beads”)刺激后，活化、增殖的CD4+T细胞，反而获得了既能抵抗感染又能清除病毒的能力——来自HIV-1感染者的CD4+T细胞活化后，能逐渐清除已感染的病毒，来自健康成人的CD4+T细胞活化后，能抵抗HIV-1而不被感染。我们以此特殊效应为基础，同时以高度易感并促进病毒增殖的PHA/IL-2活化细胞为反证，构建细胞模型并筛选出艾滋病相关的miRNA表达图谱，用以直接筛选安全有效的抗艾滋细胞药物。

发明内容：

本发明的目的在于提供艾滋病病毒靶细胞CD4+T细胞抵抗和清除HIV-1的特异表达miRNA群。

本发明采用高通量的人microRNA芯片，通过比较未刺激、CD3/CD28磁珠刺激及PHA/IL-2刺激三种状态的CD4+T细胞miRNA表达差异，筛选得到一组艾滋病病毒靶细胞CD4+T细胞抵抗和清除HIV-1的特异表达miRNA群，共包含5个miRNA，其部分或全部组合作为筛查抗艾滋细胞药物的标志；该群miRNA在CD4+T细胞抵抗和清除HIV-1状态时高表达，miRNA群中的5个miRNA的名称及序列见表1；

表1抵抗和清除HIV-1的特异表达miRNA群(共5个miRNA)

本发明中的特异表达miRNA群中的各miRNA所调控的靶基因均参与了造成不同生物学效应的显著功能(Gene Ontology，GO)和信号转导通路(pathway)，同时在信号转导网络(Signal-Net)和基因的调控网络(GeneRelNet)中处于关键结点或重要地位，因此最具有代表意义。

附图说明：

图1显示抵抗和清除状态(B)中特异高表达miRNA。

具体实施方式：

本发明通过采用高通量的人miRNA芯片，比较未刺激、CD3/CD28磁珠刺激(B)及PHA/IL-2刺激(P)三种状态的CD4+T细胞miRNA表达差异，筛选得到一组艾滋病病毒靶细胞CD4+T细胞抵抗和清除HIV-1的特异表达miRNA群，共包含5个miRNA。

具体步骤如下：

1.样本的选择和处理